STUDIES ON THE ROLE OF Ca*"1" IN THE PANCREATIC ACINAR CELL B y TWUM-AMPOFO ANSAH M . S c . T he U n i v e r s i t y o f B r i t i s h C o l u m b i a , 1980 A T H E S I S SUBMITTED I N P A R T I A L F U L F I L M E N T OF THE REQUIREMENTS FOR THE DEGREE OF DOCTOR OF PH I LOSOPHY i n THE FACULTY OF GRADUATE STUD IES ( F a c u l t y o f P h a r m a c e u t i c a l S c i e n c e s ) We a c c e p t t h i s t h e s i s a s c o n f o r m i n g t o t h e r e q u i r e d s t a n d a r d THE U N I V E R S I T Y OF B R I T I S H COLUMBIA D e c e m b e r 1 9 8 3 ©Twum-Ampofo A n s a h , 1983 In presenting t h i s thesis i n p a r t i a l f u l f i l m e n t of the requirements for an advanced degree at the University of B r i t i s h Columbia, I agree that the Library s h a l l make i t f r e e l y a v a i l a b l e for reference and study. I further agree that permission for extensive copying of t h i s thesis for scholarly purposes may be granted by the head of my department or by h i s or her representatives. I t i s understood that copying or p u b l i c a t i o n of t h i s thesis for f i n a n c i a l gain s h a l l not be allowed without my written permission. Department of Pharmaceutical Sciences The University of B r i t i s h Columbia 2075 Wesbrook Place Vancouver, Canada V6T 1W5 D a t e - ! D e c e m b e r 8, 19 83 7 Ol > o o 3 O o • o o ro Ol C-OJ - 94 -F i g u r e 13 E f f e c t o f pH o n ATP h y d r o l y t i c a c t i v i t y i n p l a s m a m e m b r a n e s o f a c i n a r c e l l s . A T P a s e a c t i v i t y was d e t e r m i n e d a t 0 . 5 mM ATP a n d 88 uM C a 2 + ( • • ) o r 88 uM M g 2 + (O O ) . T h e r e a c t i o n m e d i u m was b u f f e r e d w i t h T r i s - g l y c i n e - m a l e i c a c i d a n d a d j u s t e d b e t w e e n pH 6 a n d 9 . R e s u l t s r e p r e s e n t t h e mean o f two d i f f e r e n t d e t e r m i n a t i o n s e a c h d o n e i n d u p l i c a t e . - 96 -F i g u r e 14 A r r h e n i u s p l o t s o f A T P a s e a c t i v i t y a s a f u n c t i o n o f t e m p e r a t u r e . A T P a s e a c t i v i t y was d e t e r m i n e d i n a c i n a r memb rane p r e p a r a t i o n s a s d e s c r i b e d i n M e t h o d s i n t h e p r e s e n c e o f 88 uM C a 2 + ( • — • ) o r 88 uM M g 2 + ( 0 . . . . 0 ) . T h e pH was a d j u s t e d t o pH 7 . 4 a t e a c h t e m p e r a t u r e s e t t i n g . R e s u l t s r e p r e s e n t t h e mean o f two d i f f e r e n t e x p e r i m e n t s e a c h d o n e i n d u p l i c a t e . - 97- -1/Tx1000 - 98 -c o n c e n t r a t i o n s w e r e u s e d a s c a l m o d u l i n a c t i v a t i o n o f t h e Ca + - A T P a s e was f o u n d t o be o n l y m a r g i n a l a t h i g h e r Oa 2"*" c o n c e n t r a t i o n s . I n t h e p r e s e n c e o f e n d o g e n o u s Mg ( 1 . 5 - 2 uM) c a l m o d u l i n a c t i v a t i o n o f t h e 2+ C a s t i m u l a t e d a c t i v i t y was o b s e r v e d . A s s h o w n i n F i g u r e 1 5 , e x o g e n o u s c a l m o d u l i n s t i m u l a t e d t h e C a - A T P a s e a c t i v i t y i n a d o s e - d e p e n d e n t m a n n e r . A t 280 nM c a l m o d u l i n , t h e e n z y m e a c t i v i t y was i n c r e a s e d b y 244%, i n c r e a s i n g t o 890% a t 1 uM a n d s h o w e d s a t u r a t i o n b e y o n d 1 .7 uM . U s i n g a r a d i o i m m u n o a s s a y t e c h n i q u e , t h e c a l m o d u l i n c o n t e n t o f t h e p l a s m a memb r ane p r e p a r a t i o n s was f o u n d t o be 4 1 . 8 ± 3 . 5 n g / m g p r o t e i n . T h e p r e s e n c e o f b o u n d c a l m o d u l i n c o u l d i n p a r t e x p l a i n t h e p o o r r e s p o n s e o f t h e e n z y m e t o e x o g e n o u s l y a d d e d c a l m o d u l i n . I t w a s d e t e r m i n e d i f t h e ' a n t i c a l m o d u l i n ' a g e n t s T F P a n d CPZ w o u l d b l o c k c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f t h e C a - A T P a s e a c t i v i t y . C a - A T P a s e a c t i v i t y wa s m e a s u r e d a t 0 . 4 |jM f r e e C a 2 + a n d i n t h e p r e s e n c e a n d a b s e n c e o f 280 nM c a l m o d u l i n . F i g u r e 16 s h o w s t h a t w h i l e T F P a n d CPZ ( u p t o 175 uM) d i d n o t a f f e c t 2+ t h e b a s a l C a ^ - A T P a s e a c t i v i t y , t h e p h e n o t h i a z i n e s i n h i b i t e d c a l m o d u l i n o _ i _ s t i m u l a t e d C a - A T P a s e a c t i v i t y i n a d o s e - d e p e n d e n t m a n n e r . T h e h a l f m a x i m a l i n h i b i t i o n o f t h e c a l m o d u l i n s t i m u l a t e d a c t i v i t y o c c u r r e d a t 3 0 uM T F P a n d 55 uM C P Z , w i t h m a x i m a l i n h i b i t i o n o b s e r v e d a t 125 uM . I t was r e p o r t e d b y G i e t z e n et^ a l _ ( 1 9 8 3 ) t h a t Compound 4 8 / 8 0 , u n r e l a t e d t o t h e p h e n o t h i a z i n e s , i s a m o r e s p e c i f i c i n h i b i t o r o f c a l m o d u l i n s t i m u l a t e d C a - A T P a s e s . A s s h o w n i n F i g u r e 1 7 , c ompound 4 8 / 8 0 o x i n h i b i t e d a c t i v a t i o n o f a c i n a r p l a s m a membrane C a - A T P a s e a c t i v i t y b y c a l m o d u l i n ( 2 0 0 nM) i n a d o s e - d e p e n d e n t f a s h i o n . Compound 4 8 / 8 0 , up t o 4 0 0 u g / m l , d i d n o t h a v e a n y e f f e c t on t h e b a s a l a c t i v i t y . - 99 -F i g u r e 15 C o n c e n t r a t i o n s d e p e n d e n c e o f c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y . A T P a s e a c t i v i t y i n t h e p r e s e n c e o f 0 . 4 uM C a 2 + a n d e n d o g e n o u s M g 2 + ( m e a s u r e d t o be l - 2 u M ) . D a t a r e p r e s e n t t h e mean ± S . E . M . o f t h r e e s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s . -MOO •-[Calmodulin^ pM - 101 -F i g u r e 16 E f f e c t o f p h e n o t h i a z i n e s on c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y i n p l a s m a m e m b r a n e s o f a c i n a r c e l l s . R e a c t i o n m e d i u m c o n t a i n e d 0 . 4 uM C a 2 + , e n d o g e n o u s M g 2 + ( 1 - 2 pM) a n d t r i f l u o p e r a z i n e ( A A ) c h l o r p r o m a z i n e (0....0) o r 2 8 0 nM c a l m o d u l i n , t r i f l u o p e r a z i n e ( A — A ) a n d c h l o r p r o m a z i n e ( • • ) . D a t a r e p r e s e n t t h e mean ± S . E . M . o f f o u r s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s . ATPase ACTIVITY (%) - 103 -F i g u r e 17 E f f e c t o f Compound 48/80 o n c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f Ca - A T P a s e a c t i v i t y i n p l a s m a m e m b r a n e s o f a c i n a r c e l l s . A T P a s e a c t i v i t y was d e t e r m i n e d a t 0.4 uM C a 2 + , e n d o g e n o u s M g 2 + (1-2 pM) a n d i n t h e p r e s e n c e ( • — • ) a n d a b s e n c e (o o) o f 280 nM c a l m o d u l i n . D a t a r e p r e s e n t t h e mean o f two e x p e r i m e n t s e a c h d o n e i n d u p l i c a t e s . - 104 -- 105 -2+ T h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n on t h e Ca a c t i v a t i o n c u r v e i s s h o w n i n F i g u r e 1 8 . C a l m o d u l i n i n c r e a s e d t h e s e n s i t i v i t y o f t h e e n z y m e s y s t e m f o r c a l c i u m ; n o s i g n i f i c a n t e f f e c t was o b s e r v e d a t h i g h e r C a c o n c e n t r a t i o n s ( > 0 . 4 u M ) . C a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n was o b s e r v e d i n t h e p r e s e n c e o f e n d o g e n o u s c a l c i u m , d e t e r m i n e d b y a t o m i c a b s o r p t i o n s p e c t r o m e t r y t o be i n t h e r a n g e o f 6 - 7 uM. M a x i m a l c a l m o d u l i n 24-s t i m u l a t i o n o c c u r r e d a t 0 . 0 3 uM f r e e Ca , w i t h t h e d e g r e e o f 24-s t i m u l a t i o n d e c r e a s i n g w i t h i n c r e a s i n g f r e e Ca c o n c e n t r a t i o n s . I n t h e p r e s e n c e o f e n d o g e n o u s C a 2 + , c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f t h e C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y was d e c r e a s e d b y 20% when 1 mM EGTA was a d d e d t o t h e r e a c t i o n m e d i u m ( T a b l e V I ) . I n t h e p r e s e n c e o f 1 mM E D T A , c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n was a b o l i s h e d . T h i s c o u l d s u g g e s t t h a t e i t h e r c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f 24- 24-t h e C a - A T P a s e a c t i v i t y i s d e p e n d e n t o n e n d o g e n o u s Mg ( 1 . 5 - 2 uM 2 t t o t a l ) , o r t h a t e n d o g e n o u s Mg ^ i s r e q u i r e d f o r t h e e x p r e s s i o n o f t h e b a s a l C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y . I n o r d e r t o f u r t h e r e s t a b l i s h t h e r o l e o f M g 2 + i n t h i s s y s t e m , p l a s m a m e m b r a n e s w e r e i n c u b a t e d w i t h 1 mM EDTA a t 3 7 ° C f o r 30 m i n t o p r o d u c e m e m b r a n e s d e p l e t e d o f d i v a l e n t c a t i o n s ( E D T A - t r e a t e d 24-raembranes). F i g u r e 19 i l l u s t r a t e s t h e e f f e c t o f e x o g e n o u s l y a d d e d Mg on ( C a 2 + + M g 2 + ) - A T P a s e a c t i v i t y i n E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s . ( C a 2 + + 24-Mg ) - A T P a s e a c t i v i t y r e f e r s t o t h a t a c t i v i t y p r e s e n t f o l l o w i n g 24-s u b t r a c t i o n o f t h e a c t i v i t y m e a s u r e d i n t h e a b s e n c e o f a d d e d C a a n d i n 24- 24-t h e p r e s e n c e o f Mg . W h i l e 0 . 0 5 uM f r e e C a f a i l e d t o s t i m u l a t e t h e 24- 24-( C a + Mg ) - A T P a s e a c t i v i t y o f E D T A - t r e a t e d memb rane p r e p a r a t i o n s , 24-a d d i t i o n o f 0 . 5 uM Mg r e s u l t e d i n s t i m u l a t i o n o f t h e A T P a s e a c t i v i t y . 24-T h i s a c t i v i t y was f u r t h e r i n c r e a s e d b y 1 , 2 , a n d 5 uM Mg . T h e - 106 -Figure 18 The effect of exogenous calmodulin on Ca -ATPase activity in plasma membrane enriched preparations of pancreatic acinar ce l l s . ATPase activity in the presence of increasing Ca 2 +-concentrations (0....0) (Mg 2 + estimated to be 1-2 uM), and a calmodulin concentration (CaM) of 280 nM (•—•) Data represent mean ±SEM of four different experiments. ATPase ACTIVITY (umoles Pi • mg protT 1- h r . 1 ) - 108 -T a b l e V I E f f e c t o f EGTA a n d EDTA on C a l m o d u l i n S t i m u l a t e d 2+ C a - A T P a s e A c t i v i t y . A d d i t i o n C a 2 + - A T P a s e A c t i v i t y (% C o n t r o l ) C o n t r o l C a l m o d u l i n C a l m o d u l i n + 1 mM EDTA C a l m o d u l i n + 1 mM EGTA 100 1438 ± 7 0 100 ± 10 1154 ± 50 A T P a s e a c t i v i t y wa s a s s a y e d i n 4 8 mM T r i s - H C l pH 7 . 4 , c o n t a i n i n g 0 . 0 6 mM E G T A , 0 . 1 mM o u a b a i n , 2 mM N a N 3 , 0 . 5 mM ATP a n d e n d o g e n o u s C a 2 + ( e s t i m a t e d t o be 7 uM t o t a l ) . When c a l m o d u l i n wa s p r e s e n t i t was a d d e d a t a c o n c e n t r a t i o n o f 280 n M . D a t a r e p r e s e n t mean ± S . E . M . o f f i v e d i f f e r e n t d e t e r m i n a t i o n s . E n d o g e n o u s f r e e c a l c i u m c o n c e n t r a t i o n i s 9 . 4 n M . - 109 -F i g u r e 19 ( C a + + Mg + ) - A T P a s e a c t i v i t y i n EDTA t r e a t e d p l a s m a m e m b r a n e s o f a c i n a r c e l l s . C a l c i u m a c t i v a t i o n c u r v e 2+ d e t e r m i n e d i n t h e a b s e n c e o f Mg ( 0 ) a n d i n t h e p r e s e n o o f 0 . 5 uM ( • ) , 1 uM ( A ) , 2 uM ( • ) a n d 5 uM ( • ) Mg f ( C a + Mg ) - A T P a s e a c t i v i t y r e f e r s t o t h a t a c t i v i t y p r e s e n t f o l l o w i n g s u b t r a c t i o n o f t h e a c t i v i t y m e a s u r e d i n t h e a b s e n c e o f a d d e d c a l c i u m a n d i n t h e p r e s e n c e o f Mg + . D a t a r e p r e s e n t t h e mean ± S . E . M . o f t h r e e s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s . ( C a 2 + + Mg 2 + )-ATPase ACTIVITY (pmolesPimg protT1- hr."1) - I l l -i n c r e a s e i n a c t i v i t y was n o t d ue t o t h e a d d i t i v e e f f e c t o f Mg " ' " -ATPase 2+ b e c a u s e t h e c o n t r i b u t i o n o f Mg - A T P a s e h a d b e e n s u b t r a c t e d f r o m t h e t o t a l A T P a s e a c t i v i t y ( T a b l e V I I ) . T h e r e f o r e i t a p p e a r s t h a t t h e e f f e c t 2+ o f Mg i s t o i n c r e a s e t h e s e n s i t i v i t y o f t h e e n z y m e f o r c a l c i u m . I t was o f i n t e r e s t t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t o f M g 2 + a n d c a l m o d u l i n o n t h e c a l c i u m a c t i v a t i o n c u r v e o f E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s . F i g u r e 20 i n d i c a t e s t h a t c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s was 2+ o b s e r v e d i r r e s p e c t i v e o f t h e p r e s e n c e o r a b s e n c e o f Mg . T h i s i s i n a g r e e m e n t w i t h t h e p r e v i o u s c o n c l u s i o n t h a t M g 2 + i s r e q u i r e d o n l y f o r 2+ 2+ t h e e x p r e s s i o n o f t h e Ca - A T P a s e a c t i v i t y . C a l m o d u l i n a n d Mg s e e m t o p r o d u c e a s i m i l a r e f f e c t o n t h e a f f i n i t y o f t h e e n z y m e f o r c a l c i u m . I n o r d e r t o o b t a i n i n f o r m a t i o n o n t h e m e c h a n i s m b y w h i c h c a l m o d u l i n 2+ a c t i v a t e s t h e Ca - A T P a s e , i t i s i m p o r t a n t t o k n o w i f c a l m o d u l i n i n t e r a c t s d i r e c t l y w i t h t h e A T P a s e m o l e c u l e . To r e s o l v e t h i s p r o b l e m , 125 a n I - l a b e l e d c a l m o d u l i n g e l o v e r l a y t e c h n i q u e wa s e m p l o y e d . T h i s p r o c e d u r e i n d i c a t e s t h e a b i l i t y o f c a l m o d u l i n t o b i n d t o d e n a t u r e d t a r g e t p r o t e i n s p r e s e n t o n t h e g e l . T h e a u t o r a d i o g r a m s h o w s t h e b i n d i n g I O C o f I - l a b e l e d c a l m o d u l i n t o a n u m b e r o f memb rane p r o t e i n s ( F i g u r e 2 1 ) . I n c o n t r a s t t o o t h e r c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n s t h a t a p p e a r e d o n t h e a u t o r a d i o g r a m , c a l m o d u l i n b i n d i n g t o a 1 3 3 , 0 0 0 a n d a 2 3 0 , 0 0 0 d a l t o n 2+ p r o t e i n w e r e Ca - d e p e n d e n t a s n o b i n d i n g o c c u r r e d i n t h e p r e s e n c e o f E G T A . - 112 -T a b l e V I I M g 2 + - A T P a s e A c t i v i t y i n EDTA T r e a t e d P l a s m a M e m b r a n e P r e p a r a t i o n s f r o m P a n c r e a t i c A c i n a r C e l l s . Mg + C o n e . uM Mg - A T P a s e A c t i v i t y ( u m o l e s P i / m g p r o t / h r ) 0 . 5 0 . 1 6 + 0 . 0 7 1 .0 0 . 2 3 + 0 . 0 5 2 . 0 0 . 5 2 + 0 . 1 2 5 . 0 2 . 0 5 + 0 . 3 5 1 0 . 0 3 . 3 7 + 0 . 6 6 M e m b r a n e p r e p a r a t i o n s w e r e i n c u b a t e d w i t h 1 mM T r i s E D T A , pH 8 . 0 f o r 30 m i n a t 3 7 ° C . T h e m e m b r a n e s w e r e w a s h e d t w i c e a n d r e s u s p e n d e d i n T r i s - H C l b u f f e r pH 7 . 4 . M g 2 + - A T P a s e a c t i v i t y r e f e r s t o t h e a c t i v i t y i n t h e a b s e n c e o f a d d e d Ca a n d i n t h e p r e s e n c e o f v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s o f M g 2 + . - 113 -F i g u r e 20 T h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n a n d Mg + o n t h e c a l c i u m a c t i v a t i o n c u r v e o f EDTA t r e a t e d p l a s m a m e m b r a n e s o f a c i n a r c e l l s . M e m b r a n e s w e r e i n c u b a t e d w i t h 1 mM T r i s EDTA pH 8 . 0 f o r 30 m i n a t 3 7 ° C , w a s h e d f r e e o f EDTA a n d a s s a y e d f o r A T P a s e a c t i v i t y . T h e c a l c i u m a c t i v a t i o n c u r v e i n t h e a b s e n c e o f Mg ( o ) , i n t h e p r e s e n c e o f 0 . 5 uM Mg ( • ) , 2 8 0 nM C a l m o d u l i n ( A ) a n d M g 2 + p l u s c a l m o d u l i n (A) i s s h o w n . D a t a r e p r e s e n t t h e mean ± S . E . M . o f t h r e e s e p a r a t e d e t e r m i n a t i o n s . Ca 2 + -ATPase Activity: prnoles Pi/mg prot/hr i o o I ION I mM - 140 -T a b l e V I I I A T P a s e a n d L a c t a t e D e h y d r o g e n a s e A c t i v i t i e s o f I n t a c t P a n c r e a t i c A c i n a r C e l l s a n d H o m o g e n a t e s . S p e c i f i c A c t i v i t y ( u m o l e s / m g p r o t / h r ) I n t a c t C e l l s C e l l H o m o g e n a t e s 4 . 1 6 ± 0 . 8 5 . 7 8 ± 0 . 5 1 . 8 1 ± 0 . 5 I n t a c t a c i n a r c e l l s w e r e r e s u s p e n d e d i n p h o s p h a t e f r e e K r e b s - R i n g e r -b i ^ a r b o n a t e s o l u t i o n c o n t a i n i n g 2 mM A T P , 5 mM N a N 3 a n d 1 mM C a 2 o r Mg + a t a c o n c e n t r a t i o n o f 10 c e l l s / m l f o r 15 m i n a t 3 7 ° C . A p o r t i o n o f t h e c e l l s u s p e n s i o n wa s s i m i l a r l y t r e a t e d e x c e p t t h a t i t wa s s u b j e c t e d t o f r e e z i n g a n d t h a w i n g b e f o r e e n z yme a s s a y ( c e l l h o m o g e n a t e s ) . I n b o t h c a s e s a l i q u o t s o f t h e i n c u b a t i o n m e d i a w e r e c e n t r i f u g e d a t 1 0 , 0 0 0 r pm f o r 45 s e c a n d t h e s u p e r n a t a n t a s s a y e d f o r i n o r g a n i c p h o s p h a t e o r l a c t a t e d e h y d r o g e n a s e a c t i v i t y . S p e c i f i c a c t i v i t y i s e x p r e s s e d a s u m o l e s p e r mg c e l l p r o t e i n . R e s u l t s r e p r e s e n t mean ± S . E . M . o f f o u r d i f f e r e n t e x p e r i m e n t s . C a " ' " -ATPase 4 . 2 6 ± 0 . 6 M g 2 + - A T P a s e 5 . 2 2 ± 0 . 3 L a c t a t e d e h y d r o g e n a s e 0 . 0 1 ± 0 . 0 - 141 -A T P - d e p e n d e n t Ca - t r a n s p o r t ( s e e t h e p r e v i o u s s e c t i o n ) . A s i m i l a r o r i e n t a t i o n a s t h a t n o t e d i n t h e i n t a c t c e l l s wa s o b s e r v e d ; t h e v e s i c l e s e x h i b i t e d a n a c c e s s i b l e (Mg " r + Ca ) - A T P a s e a c t i v i t y c o m p a r a b l e w i t h t h a t o f b r o k e n m e m b r a n e s ( T a b l e I X ) . T h i s i n d i c a t e s t h a t t h e m a j o r i t y o f t h e s e v e s i c l e s w e r e r i g h t - s i d e o u t (> 9 5 % ) . C o n s i s t e n t w i t h a f u l l y a c c e s s i b l e c a t a l y t i c s i t e , n e i t h e r d e o x y c h o l a t e ( 0 . 0 4 - 0 . 2 5 mM) n o r f r e e z i n g a n d t h a w i n g c o u l d u n m a s k l a t e n t a c t i v i t y ( T a b l e I X ) . - 142 -T a b l e I X T h e O r i e n t a t i o n o f C a 2 + - A T P a s e A c t i v i t y i n P l a s m a M e m b r a n e V e s i c l e P r e p a r a t i o n s . T r e a t m e n t % C o n t r o l C o n t r o l 100 DOC 40 uM 1 0 1 . 3 80 uM 1 0 3 . 8 120 uM 9 8 . 7 160 uM 9 8 . 5 200 uM 9 1 . 0 2 4 0 uM 9 0 . 7 F r e e z e t h a w l x 1 0 1 . 2 F r e e z e t h a w 2 x 9 7 . 5 P l a s m a memb rane v e s i c l e p r e p a r a t i o n s w e r e i n c u b a t e d i n 20 mM T r i s b u f f e r pH 7 . 4 c o n t a i n i n g 0 . 3 M s u c r o s e , 2 mM N a N 3 , 0 . 5 mM A T P , 21 uM f r e e C a 2 + a n d i n t h e p r e s e n c e o f v a r i o u s c o n c e n t r a t i o n s o f d e o x y c h o l a t e ( D O C ) . D a t a r e p r e s e n t t h e mean o f two d i f f e r e n t e x p e r i m e n t s , e a c h d o n e i n d u p l i c a t e . - 143 -DISCUSSION A Ca " ' " -ATPase a c t i v i t y h a s b e e n c h a r a c t e r i z e d i n p l a s m a m e m b r a n e e n r i c h e d p r e p a r a t i o n s f r o m p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . I t s s u b c e l l u l a r d i s t r i b u t i o n p a r a l l e l s t h a t o f p l a s m a membrane m a r k e r e n z y m e s , s u g g e s t -i n g t h a t t h e C a " ' " -ATPase a c t i v i t y i s e n d o g e n o u s t o t h e p l a s m a m e m b r a n e . V a r i o u s w o r k e r s ( F o r g e t a n d H e i s l e r 1 9 7 6 ; M i l u t i n o v i c _ _ a l 1 9 7 7 ; L a m b e r t a n d C h r i s t o p h e 1 9 7 8 ; L e B e l e t a l 1 9 8 0 ; M a r t i n a n d S e n i o r 1 9 8 0 ) 2+ h a v e d e s c r i b e d a Ca - A T P a s e a c t i v i t y i n p l a s m a m e m b r a n e s p r e p a r e d f r o m p a n c r e a t i c t i s s u e h o m o g e n a t e s . S i n c e t h e p a n c r e a s i s a h e t e r o c e l l u l a r 2+ o r g a n , t h e C a - A T P a s e a c t i v i t y o b s e r v e d c o u l d n o t b e d i r e c t l y r e l a t e d t o a c i n a r c e l l f u n c t i o n . T h e p r e s e n t s t u d y e m p l o y e d a h o m o g e n e o u s p o p u l a t i o n o f a c i n a r c e l l s . R a d i o i m m u n o a s s a y s h o w e d a 35 - 75% d e c r e a s e i n i n s u l i n l e v e l s i n t h e f i n a l p r e p a r a t i o n . T h e r e s i d u a l i n s u l i n d e t e c t e d may be i n s u l i n d i s l o d g e d f r o m b i n d i n g s i t e s on a c i n a r c e l l s ( K o r c _ t a l 1 9 7 8 ) r a t h e r t h a n c o n t a m i n a t i o n b y p - c e l l s . C y t o -c h e m i c a l a n a l y s i s r e v e a l e d one c e l l t y p e w i t h f e a t u r e s c h a r a c t e r i s t i c s o f a c i n a r c e l l s . T h e s t a i n i n g t e c h n i q u e u s e d was g e n e r a l e n o u g h t o d e t e c t a n y o t h e r c e l l t y p e p r e s e n t . I n c o n t r a s t t o p r e v i o u s s t u d i e s ( F o r g e t a n d H e i s l e r 1 9 7 6 ; M i l u t i n o v i c _ _ a l 1 9 7 7 ; L a m b e r t a n d C h r i s t o p h e 1 9 7 8 ; L e B e l et_ a l 1 9 8 0 ; M a r t i n a n d S e n i o r 1 9 8 0 ) w h i c h r e p o r t e d c a l c i u m s e n s i t i v i t y o f t h e A T P a s e i n t h e m i l l i m o l a r r a n g e , a h i g h a f f i n i t y C a 2 + - A T P a s e w i t h a K j f o r 2+ C a o f 1 .7 uM wa s o b s e r v e d i n t h e s e p l a s m a memb rane p r e p a r a t i o n s . - 144 -S i n c e t h e f r e e c o n c e n t r a t i o n o f c a l c i u m i n t h e a c i n a r c e l l c y t o s o l i s t y p i c a l l y b e t w e e n 0 . 1 a n d 10 u M , t h i s e n z y m e may p l a y a r o l e i n t h e r e g u l a t i o n o f i n t r a c e l l u l a r f r e e c a l c i u m c o n c e n t r a t i o n s . T h e C a - E G T A b u f f e r s y s t e m a n d t h e l o w ATP c o n c e n t r a t i o n s ( 0 . 5 mM) u s e d a r e n e c e s s a r y t o r e v e a l t h e h i g h a f f i n i t y c o m p o n e n t o f t h e C a 2 + - A T P a s e ( L o t e r s z t a j n et_ a l 1 9 8 1 ) . T h e s e c o n d i t i o n s w e r e n o t e m p l o y e d b y p r e v i o u s w o r k e r s a n d c o u l d e x p l a i n why t h e h i g h a f f i n i t y c o m p o n e n t wa s n o t o b s e r v e d i n t h e i r s t u d i e s . B y t h e u s e o f E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s , a n a p p a r e n t r e q u i r e m e n t o f 24- 24-t h i s Ca - A T P a s e a c t i v i t y f o r Mg wa s d e m o n s t r a t e d . P r e s u m a b l y , e n d o g e n o u s o r t i g h t l y b o u n d M g 2 + i s s u f f i c i e n t t o s a t i s f y t h e M g 2 + 2+ 24-r e q u i r e m e n t o f t h i s C a - A T P a s e . T h e p l a s m a memb rane Ca - A T P a s e o f c e l l s f r o m c o r p u s l u t e u m ( V e r m a a n d P e n n i s t o n 1 9 8 1 ) , l i v e r ( L o t e r s z t a j n e t a l 1 9 8 1 ) p a n c r e a t i c i s l e t s ( K o t a g a l e t a l 1 9 8 2 ) a n d e m b r y o n i c b o n e c e l l s i n c u l t u r e ( S h e n j^t a l 1 9 8 3 ) h a v e b e e n s hown t o h a v e s i m i l a r M g 2 + 24-r e q u i r e m e n t s . I n c r e a s i n g t h e Mg c o n c e n t r a t i o n i n c r e a s e s t h e A T P a s e a c t i v i t y , e v e n t u a l l y r e a c h i n g ATP h y d r o l y t l c r a t e s s i m i l a r t o t h a t 24-o b s e r v e d i n t h e p r e s e n c e o f C a a l o n e . E v i d e n c e o b t a i n e d i n d i c a t e s t h a t t h e a c t i v i t y m e a s u r e d i n t h e p r e s e n c e o f C a 2 + o r M g 2 + i s o n e e n z y m e w i t h a c a t a l y t i c s i t e t h a t h a s d i f f e r e n t a f f i n i t i e s f o r t h e c a t i o n s : F i r s t , s a t u r a t i n g c o n c e n t r a t i o n s o f C a 2 + a n d M g 2 + p r o d u c e t h e same 24- 24-max imum a c t i v i t y . S e c o n d , b o t h Ca - A T P a s e a n d Mg - A T P a s e a c t i v i t i e s h a v e s i m i l a r pH o p t i m a . T h i r d , t h e r e i s a s t r i k i n g s i m i l a r i t y i n t h e i r s u b s t r a t e r e q u i r e m e n t p r o f i l e . H o w e v e r , d i f f e r e n c e s o b s e r v e d i n t r a n s i t i o n t e m p e r a t u r e s f o r t h e M g 2 + a n d C a 2 + a c t i v i t y a n d t h e p o s s i b l e - 145 -p r e s e n c e o f d i f f e r e n t p h o s p h o e n z y m e i n t e r m e d i a t e s c a n n o t be e x p l a i n e d o n t h e b a s i s o f a s i n g l e e n z y m e . 2+ T h e a c i n a r p l a s m a memb rane Ca - A T P a s e a c t i v i t y was s t i m u l a t e d by c a l m o d u l i n ; t h i s s t i m u l a t i o n wa s b l o c k e d b y m i c r o m o l a r c o n c e n t r a t i o n s o f t r i f l u o p e r a z i n e a n d c h l o r p r o m a z i n e . T h e c o n c e n t r a t i o n s o f t r i f l u o p e r a z i n e ( 3 0 uM) a n d c h l o r p r o m a z i n e ( 5 5 uM) t h a t p r o d u c e d h a l f m a x i m a l i n h i b i t i o n o f t h e c a l m o d u l i n s t i m u l a t e d a c t i v i t y a r e s i m i l a r t o t h o s e r e p o r t e d f o r o t h e r s y s t e m s ( R o u f o g a l i s 1 9 8 2 ) . A l t h o u g h t h e c o n c e n t r a t i o n s o f c a l m o d u l i n u s e d w e r e h i g h (K^ = 750 nM) c o m p a r e d t o t h o s e r e q u i r e d f o r a c t i v a t i o n o f p h o s p h o d i e s t e r a s e a n d e r y t h r o c y t e C a 2 + - A T P a s e ( S c h a r f f 1 9 8 1 ) , m u c h h i g h e r c o n c e n t r a t i o n s o f c a l m o d u l i n a r e 2+ r e q u i r e d f o r t h e a c t i v a t i o n o f t h e Ca - A T P a s e o f i s l e t c e l l p l a s m a memb r ane ( K o t a g a l e _ _ 1 1 9 8 2 ) a n d c a n i n e v e n t r i c l e s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m ( K i r c h b e r g e r a n d A n t o n e t z 1 9 8 2 ) . T h e c a l m o d u l i n ( 4 2 n g / m g p r o t e i n ) t h a t r e m a i n e d b o u n d t o t h e m e m b r a n e s d u r i n g i s o l a t i o n c o u l d e x p l a i n t h i s d e c r e a s e d r e s p o n s i v e n e s s . T h e s a t u r a t i n g c o n c e n t r a t i o n o f c a l m o d u l i n u s e d ( 1 . 7 uM) i s o n l y a f r a c t i o n o f t h e t o t a l a m o u n t o f c a l m o d u l i n i n t h e c y t o p l a s m o f a c i n a r c e l l s ( e s t i m a t e d t o be 5 uM; V a n d e r m e e r s e t a l 1 9 7 7 ) . C a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n o f t h e C a 2 + - A T P a s e o b s e r v e d I n t h e a b s e n c e o f a d d e d c a l c i u m ( T a b l e V I ) c o u l d be due t o t h e p r e s e n c e o f e n d o g e n o u s c a l c i u m ; u n d e r t h e c o n d i t i o n o f t h e a s s a y , t h i s i s e s t i m a t e d t o be 9nM (7 uM t o t a l ) . I n t h e p r e s e n c e o f 1 mM E G T A , o n l y 20% o f t h e c a l m o d u l i n a c t i v a t i o n was l o s t , s u g g e s t i n g t h a t p e r h a p s n o t 2+ a l l e n d o g e n o u s Ca w a s c h e l a t e d . T h e EGTA c o n c e n t r a t i o n s w e r e n o t f u r t h e r i n c r e a s e d t o a v o i d t h e d i r e c t e f f e c t o f EGTA on A T P a s e a c t i v i t y - 146 -o b s e r v e d b y o t h e r s ( S a r k a d i et_ j i l 1 9 7 9 ; A l - J o b o r e a n d R o u f o g a l i s 1 9 8 1 a ; K o t a g a l et^ al^ 1 9 8 3 ) . T h e l a c k o f c a l m o d u l i n s t i m u l a t i o n i n t h e p r e s e n c e o f 1 mM EDTA c a n be r e l a t e d t o t h e f a c t t h a t M g 2 + c o n f e r s C a 2 + s e n s i t i v i t y t o t h e A T P a s e a c t i v i t y a s s h o w n b y e x p e r i m e n t s w i t h E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s ( F i g 1 9 ) . E x p e r i m e n t s p e r f o r m e d t o d e t e r m i n e t h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n o n E D T A - t r e a t e d m e m b r a n e s r e v e a l e d c o m p l e x k i n e t i c s ( F i g . 2 0 ) . C a l m o d u l i n 2+ s t i m u l a t i o n was o b s e r v e d b o t h i n t h e a b s e n c e o f a d d e d Ca a n d i n t h e p r e s e n c e o f Mg a l o n e . T h e d e g r e e o f s t i m u l a t i o n wa s f o u n d t o be 2+ c o n s i s t e n t l y l o w e r u p o n a d d i t i o n o f 0 . 0 1 5 uM C a i n b o t h c a s e s . I n l i g h t o f t h e o b s e r v a t i o n s o f K o t a g a l et^ j a l ( 1 9 8 3 ) i n d i c a t i n g t h a t 2+ C a - E G T A s t i m u l a t e s p a n c r e a t i c i s l e t p l a s m a memb r ane C a - A T P a s e , i t i s p o s s i b l e t h a t t h e C a - E G T A b u f f e r u s e d may h a v e p r o d u c e d d i r e c t e f f e c t s on t h e A T P a s e u n d e r t h e s e c o n d i t i o n s . 125 T h e I - l a b e l e d c a l m o d u l i n g e l o v e r l a y t e c h n i q u e r e v e a l e d a 2+ C a - d e p e n d e n t b i n d i n g t o a 1 3 3 , 0 0 0 d a l t o n p r o t e i n . T h e m o l e c u l a r w e i g h t o f t h i s p r o t e i n c o m p a r e s f a v o u r a b l y w i t h t h a t o f e r y t h r o c y t e C a 2 + - A T P a s e , r e p o r t e d t o be 1 3 8 , 0 0 0 ( C a r a f o l i e t a l 1 9 8 2 ) . The p r e s e n c e o f a 1 3 3 , 0 0 0 d a l t o n c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n , c o u p l e d t o t h e i d e n t i f i c a t i o n o f a h y d r o x y l a m i n e s e n s i t i v e p h o s p h o p r o t e i n o f s i m i l a r 2 i 2+ m o l e c u l a r w e i g h t o b s e r v e d i n t h e p r e s e n c e o f Ca " r a n d Mg i n t h i s s t u d y p r o v i d e s c o n v i n c i n g e v i d e n c e t h a t t h e 1 3 3 , 0 0 0 d a l t o n p r o t e i n i s t h e 2 i Ca —ATPa s e m o l e c u l e , a n d t h a t l i k e many o t h e r c a l m o d u l i n d e p e n d e n t e n z y m e s i t i s s t i m u l a t e d b y a d i r e c t i n t e r a c t i o n w i t h c a l m o d u l i n . T a w a t a a n d F i e l d ( 1 9 8 2 ) h a v e r e p o r t e d t h e p r e s e n c e o f 2 2 0 , 0 0 0 a n d - 147 -1 5 0 , 0 0 0 d a l t o n c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n s i n r a t l i v e r a n d b o v i n e t h y r o i d p l a s m a m e m b r a n e s b u t n o t i n e r y t h r o c y t e p l a s m a m e m b r a n e s . T h e s e c a l c i u m - d e p e n d e n t c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n s a p p e a r t o be c o m p o n e n t s o f t h e c y t o s k e l e t o n s i n c e t h e y r e m a i n e d i n t h e p e l l e t a f t e r t r e a t m e n t o f t h e m e m b r a n e s w i t h T r i t o n X - 1 0 0 . I n t e r e s t i n g l y , a s i m i l a r c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n ( M r = 2 3 0 , 0 0 0 ) w a s o b s e r v e d i n p a n c r e a t i c a c i n a r p l a s m a m e m b r a n e s ( F i g . 2 1 ) . T h i s p r o t e i n may i n t e r a c t w i t h o t h e r c o m p o n e n t s o f t h e c y t o s k e l e t o n t o r e g u l a t e e x o c y t o s i s i n t h e e x o c r i n e p a n c r e a s . I t m u s t b e n o t e d , t h o u g h , t h a t s e v e r a l c a l c i u m - i n d e p e n d e n t c a l m o d u l i n - b i n d i n g p r o t e i n s w e r e p r e s e n t i n p a n c r e a t i c a c i n a r p l a s m a m e m b r a n e s , ( p r e s e n c e o f e n d o g e n o u s C a 2 + a n d E G T A ) . The f u n c t i o n o f t h e s e c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n s i s n o t k n o w n . I t h a s b e e n s hown t h a t d u r i n g t h e p u r i f i c a t i o n o f e r y t h r o c y t e ( C a r a f o l i _ t a l 1 9 8 2 ) a n d h e a r t s a r c o l e m m a ( C a r o n i _ t a l 1 9 8 2 ) C a - A T P a s e , a l a r g e p r o p o r t i o n o f t h e p r o t e i n s t h a t b i n d t o t h e c a l m o d u l i n a f f i n i t y c o l u m n c a n be e l u t e d w i t h 2+ a C a w a s h . I n i n t a c t a c i n a r c e l l s i t wa s s h o w n t h a t p h e n o t h i a z i n e s i n h i b i t c a l c i u m m e d i a t e d a m y l a s e r e l e a s e , p o s s i b l y b y a c t i n g on a c a l m o d u l i n - r e g u l a t e d s t e p i n t h e s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g p r o c e s s . T h i s c o r r o b o r a t e s t h e o b s e r v a t i o n s o f H e i s l e r e _ a l ( 1 9 8 1 ) who h a v e s u g g e s t e d t h a t c a l m o d u l i n may h a v e a f u n c t i o n a l r o l e i n e x o c r i n e p a n c r e a t i c e n z y m e s e c r e t i o n . A t h i g h e r c o n c e n t r a t i o n s ( 1 0 - l t M o r g r e a t e r ) , p h e n o t h i a z i n e s may h a v e o t h e r e f f e c t s o n t h e f u n c t i o n o f i n t a c t c e l l s t h a t may a c c o u n t f o r t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o n p a n c r e a t i c a m y l a s e s e c r e t i o n a s i n d i c a t e d b y W i l l i a m s _ t a l ( 1 9 7 7 ) a n d S i n g h - 148 -( 1 9 8 0 ) . P h e n o t h i a z i n e s a r e h y d r o p h o b i c m o l e c u l e s w h i c h p a r t i t i o n n o n - s e l e c t i v e l y i n t o m e m b r a n e s a n d o t h e r h y d r o p h o b i c s i t e s , w i t h p o s s i b l e c o n s e q u e n c e s o t h e r t h a n a n t a g o n i s m o f Ca - d e p e n d e n t e n z y m e s y s t e m s . P h e n o t h i a z i n e s c a n i n h i b i t ( N a + + K + ) - A T P a s e w h i c h may a f f e c t i o n g r a d i e n t s o r t u b u l i n , w h i c h i n t u r n c o u l d a f f e c t t h e d i s t r i b u t i o n o f m e m b r a n e - b o u n d r e c e p t o r s a n d s e c r e t i o n p r o c e s s e s ( R o u f o g a l i s 1 9 8 2 ) . I n a d d i t i o n , t h e p h e n o t h i a z i n e s h a v e a - a d r e n e r g i c a n d m u s c a r i n i c r e c e p t o r b l o c k i n g a c t i v i t i e s ( R o u f o g a l i s 1 9 8 2 ) w h i c h may c o m p l i c a t e t h e b i o l o g i c a l e f f e c t s o f t h e s e a g e n t s . T h e r e f o r e , d a t a o b t a i n e d o n i s o l a t e d t i s s u e p r e p a r a t i o n s s h o u l d be i n t e r p r e t e d w i t h c a u t i o n . N e v e r t h e l e s s , u n d e r c o n t r o l l e d c o n d i t i o n s , t h e i n h i b i t o r y e f f e c t s o f p h e n o t h i a z i n e s h a v e b e e n u s e d t o i n v o k e t h e r o l e o f c a l m o d u l i n i n t h e f u n c t i o n o f a n u m b e r o f c e l l s i n c l u d i n g p a n c r e a t i c i s l e t s ( G a g l i a r d i n o et^ a l 1 9 8 0 ) , a n t e r i o r p i t u i t a r y c e l l s ( M e r i t t et^ a l 1 9 8 2 ) a n d m a s t c e l l s ( D o u g l a s a n d N e m e t h 1 9 8 2 ) . C l e a r l y , m o r e s p e c i f i c a n t i c a l m o d u l i n a g e n t s a r e n e e d e d f o r s t u d i e s i n v o l v i n g i s o l a t e d t i s s u e p r e p a r a t i o n s . Some o f t h e m o r e s p e c i f i c a n t i c a l m o d u l i n a g e n t s c i t e d i n t h e l i t e r a t u r e a r e c a l m i d a z o l i u m ( B e l l e 1 9 8 1 ) , W7 ( H i d a k a a n d T a n a k a 1 9 8 2 ) a n d Compound 4 8 / 8 0 ( G i e t z e n e t a l 1 9 8 3 ) . I n t h e p a n c r e a s , c a l m o d u l i n h a s b e e n s h o w n t o s t i m u l a t e n o t o n l y t h e n i p l a s m a memb rane C a - A T P a s e a c t i v i t y ( s e e a b o v e ) b u t a l s o c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e ( V a n d e r m e e r s et^ al_ 1 9 8 3 ) . I n v i e w o f t h e f a c t t h a t t h e r o l e o f c y c l i c n u c l e o t i d e s i n c a l c i u m - m e d i a t e d e n z y m e r e l e a s e f r o m t h e e x o c r i n e p a n c r e a s i s s t i l l n o t c o n c l u s i v e , t h e m e c h a n i s m by w h i c h c a l m o d u l i n a c t i v a t i o n o f p h o s p h o d i e s t e r a s e r e g u l a t e s - 149 -p a n c r e a t i c e n z y m e s e c r e t i o n i s u n c e r t a i n . T h e r o l e o f p r o t e i n p h o s p h o r y l a t i o n i n t h e r e g u l a t i o n o f p a n c r e a t i c f u n c t i o n h a s b e e n e x a m i n e d r e c e n t l y . B u r n h a m a n d W i l l i a m s ( 1 9 8 2 ) h a v e s h o w n t h a t c a r b a c h o l a n d CCK8 a t c o n c e n t r a t i o n s t h a t p r o d u c e a m y l a s e s e c r e t i o n i n c r e a s e d t h e p h o s p h o r y l a t i o n o f a M r = 3 2 , 0 0 0 p a r t i c u l a t e p r o t e i n a n d Mj. = 1 6 , 0 0 0 a n d 2 3 , 0 0 0 s o l u b l e p r o t e i n s . T h e s e a g e n t s a l s o a l t e r e d t h e p h o s p h o r y l a t i o n o f Mj. = 2 1 , 0 0 0 a n d 2 0 , 5 0 0 s o l u b l e p r o t e i n s . S i n c e i n s u l i n w h i c h d o e s n o t p r o d u c e d i r e c t s t i m u l a t i o n o f a m y l a s e r e l e a s e d i d n o t a l t e r t h e p h o s p h o r y l a t i o n o f t h e 2 1 , 0 0 0 a n d 2 0 , 5 0 0 d a l t o n s o l u b l e p r o t e i n s , t h e s e a u t h o r s c o n c l u d e d t h a t t h e two p r o t e i n s a r e s p e c i f i c a l l y i n v o l v e d i n t h e p r o c e s s o f e x o c y t o s i s ( B u r n h a m a n d W i l l i a m s 1 9 8 2 ) . M o r e r e c e n t l y , a p h o s p h o l i p i d - s e n s i t i v e 2+ Ca - d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a s e a n d i t s e n d o g e n o u s s u b s t r a t e p r o t e i n s ( M r = 3 8 , 0 0 0 , 3 0 , 0 0 0 , 2 2 , 0 0 0 a n d 1 5 , 0 0 0 ) h a v e b e e n d e m o n s t r a t e d i n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l e x t r a c t s ( W r e n n 1 9 8 3 ) . C a l m o d u l i n was p a r t i a l l y e f f e c t i v e a s a c o f a c t o r f o r p h o s p h o r y l a t i o n o f t h e 3 8 , 0 0 0 s u b s t r a t e p r o t e i n ( W r e n n 1 9 8 3 ) . T h e s e a u t h o r s e x a m i n e d p h o s p h o r y l a t i o n r e a c t i o n s i n e i t h e r t o t a l p a r t i c u l a t e ( B u r n h a m a n d W i l l i a m s 1 9 8 2 ) o r s o l u b l e f r a c t i o n s ( B u r n h a m a n d W i l l i a m s 1 9 8 2 ; W r e n n 1 9 8 3 ) w i t h n o r e f e r e n c e t o t h e s u b c e l l u l a r o r i g i n o f t h e s u b s t r a t e . I n t h e s e p r e s e n t s t u d i e s when p a n c r e a t i c a c i n a r p l a s m a m e m b r a n e s a r e i n c u b a t e d i n t h e p r e s e n c e o f C a 2 + , M g 2 + a n d 0 . 5 mM ATP f o r 5 m i n a t 3 0 ° C , c o v a l e n t p h o s p h o p r o t e i n f o r m a t i o n was o b s e r v e d i n a n u m b e r o f p r o t e i n s ( F i g . 2 5 ) . The d e g r e e o f p h o s p h o r y l a t o n o f t h e 1 9 , 0 0 0 a n d 3 0 , 0 0 0 d a l t o n p r o t e i n s wa s e n h a n c e d b y c a l m o d u l i n . O f p a r t i c u l a r - 150 -i n t e r e s t i s t h e s i m i l a r i t y o f t h i s 3 0 , 0 0 0 d a l t o n p r o t e i n p h o s p h o r y l a t i o n t o t h e r e p o r t e d p h o s p h o r y l a t i o n o f a 3 2 , 0 0 0 d a l t o n p a r t i c u l a t e p r o t e i n u p o n s t i m u l a t i o n o f a c i n a r c e l l s w i t h c a r b a c h o l a n d CCK8 ( B u r n h a m a n d W i l l i a m s 1 9 8 2 ) . T h i s l a t t e r r e s u l t p r o v i d e s a p o s s i b l e l i n k b e t w e e n p h o s p h o r y l a t i o n o f p l a s m a membrane p r o t e i n s a n d t h e r e s p o n s e o f a c i n a r c e l l s t o s e c r e t a g o g u e s . T h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n o n p a n c r e a t i c e n z y m e s e c r e t i o n c a n t h u s be e n v i s a g e d a s t h r e e - f o l d : C a l m o d u l i n c o u l d a c t on a p l a s m a m e m b r a n e c a l c i u m pump t o r e g u l a t e i n t r a c e l l u l a r c a l c i u m , r e g u l a t e t h e s e c r e t o r y p r o c e s s b y i n t e r a c t i n g w i t h t h e c y t o s k e l e t o n v i a t h e h i g h m o l e c u l a r w e i g h t c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n o b s e r v e d , o r e n h a n c e p h o s p h o r y l a t i o n o f t a r g e t p r o t e i n s i n t h e p l a s m a m e m b r a n e . T h e A T P a s e a c t i v i t y d e s c r i b e d i n t h i s p r e s e n t s t u d y h a s c e r t a i n c h a r a c t e r i s t i c s s i m i l a r t o t h e ATP d i p h o s p h o h y d r o l a s e p r e s e n t i n a n u m b e r o f t i s s u e s . T h e e n z y m e c a n h y d r o l y s e n u c l e o s i d e t r i p h o s p h a t e s ( A T P , G T P ) a n d d i p h o s p h a t e ( A D P ) a t h i g h r a t e s i n t h e p r e s e n c e o f C a 2 + o r Mg . T h e l a c k o f s e n s i t i v i t y t o a z i d e a n d m o n o v a l e n t c a t i o n s ( t h i s s t u d y ) , a s w e l l a s o u a b a i n , r u t h e n i u m r e d , o l i g o m y c i n ( L e B e l e t a l 1 9 8 0 ) a n d v a n a d a t e ( M a r t i n a n d S e n i o r 1 9 8 0 ) d i s t i n g u i s h e s t h e ATP d i p h o s p h o h y d r o l a s e f r o m o t h e r A T P a s e s . A s i m i l a r e n z y m e h a s b e e n c h a r a c t e r i z e d i n a n u m b e r o f t i s s u e s i n c l u d i n g t h e l i v e r ( G a r n e t t e t al^ 1 9 7 6 ) , k i d n e y ( S a f f r a n a n d K i n n e 1 9 7 4 ) , m a s t c e l l s ( C o o p e r a n d S t a n w o r t h 1 9 7 6 ) , s k e l e t a l ( M a l o u f a n d M e i s s n e r 1 9 7 9 ) , S m o o t h ( Kwan 1 9 8 2 ) a n d c a r d i a c m u s c l e s ( A n a n d - S r i v a s t a r a et^ a l , 1 9 8 2 ) a n d mouse s a r c o m a s , human a s t r o c y t o m a , o a t c e l l c a r c i n o m a a n d m e l a n o m a ( K n o w l e s , j e t al^ 1 9 8 3 ) . T h e - 151 -f u n c t i o n o f t h i s enzymie s y s t e m i s l a r g e l y u n k n o w n . K w a n ( 1 9 8 2 ) h a s 2+ 2+ s h o w n t h a t t h e Mg o r Ca A T P a s e a c t i v i t y o f p l a s m a m e m b r a n e s i s o l a t e d f r o m v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e wa s d e c r e a s e d i n s p o n t a n e o u s l y h y p e r t e n s i v e r a t s . I n r a t h e a r t s a r c o l e m m a , i t h a s b e e n p r o p o s e d t h a t t h e 2+ Ca - A T P a s e c o m p o n e n t may be i n v o l v e d i n o p e n i n g o f c a l c i u m c h a n n e l s ( A n a n d - S r i v a s t a v a e t a l 1 9 8 2 ) . A f e a t u r e o f some o f t h e ATP d i p h o s p h o h y d r o l a s e s i s a n e x t e r n a l l y - o r i e n t e d a c t i v e s i t e . U s i n g i s o l a t e d i n t a c t c e l l s i n t h i s p r e s e n t s t u d y i t was d e m o n s t r a t e d t h a t p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s c a n h y d r o l y s e e x t e r n a l l y a d d e d ATP i n t h e p r e s e n c e o f C a 2 + o r M g 2 + ( F i g 3 0 ) . D u r i n g t h e c o u r s e o f t h i s s t u d y H a m l y n a n d S e n i o r ( 1 9 8 3 ) p r e s e n t e d e v i d e n c e t o s u g g e s t t h a t 9 0 - 9 5 % o f t h e p a n c r e a t i c a c i n a r p l a s m a m e m b r a n e C a o r Mg - A T P a s e a c t i v i t y i s e x p r e s s e d a s a n e c t o - e n z y m e . W h i l e t h i s i s i n a g r e e m e n t w i t h t h e p r e s e n t s t u d i e s , t h e q u e s t i o n s t i l l r e m a i n s w h e t h e r a l l t h e A T P a s e a c t i v i t y a s s o c i a t e d w i t h t h e p l a s m a membrane i s e x t e r n a l l y o r i e n t e d a n d n a t i v e t o t h e p l a s m a m e m b r a n e . B o t h b i o c h e m i c a l a n d c y t o c h e m i c a l s t u d i e s h a v e s hown t h a t C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y e x i s t s i n z y m o g e n g r a n u l e m e m b r a n e s ( B e a u d o i n a l 1 9 8 0 ) . T h e p r e s e n c e o f l e a d d e p o s i t s o v e r t h e l u m i n a l s u r f a c e o f a c i n a r c e l l s a n d o n t h e i n n e r s u r f a c e o f z y m o g e n g r a n u l e m e m b r a n e s a t t h e o u t s e t o f f u s i o n i n d i c a t e s t h a t p a r t o f t h e p l a s m a memb rane Ca - A T P a s e c o u l d be d e r i v e d f r o m z y m o g e n g r a n u l e m e m b r a n e s a s a r e s u l t o f e x o c y t o s i s ( B e a u d o i n _ t a l 1 9 8 0 ) . I f t h e a c t i v e s i t e o f t h e C a 2 + - A T P a s e i s s i t u a t e d o n t h e c y t o p l a s m i c s i d e o f t h e z y m o g e n g r a n u l e s , t h e n f o l l o w i n g f u s i o n w i t h t h e p l a s m a m e m b r a n e , t h e e n z y m e w o u l d be i n t e r n a l l y o r i e n t e d . So f a r t h i s - 152 -h a s n o t b e e n d e m o n s t r a t e d c y t o c h e m i c a l l y . T h e r e f o r e , u n t i l t h e m e c h a n i s m o f memb r ane f u s i o n i s f u l l y u n d e r s t o o d t h e q u e s t i o n o f t h e d i s t r i b u t i o n a n d o r i g i n o f p l a s m a memb rane Ca - A T P a s e w i l l r e m a i n u n r e s o l v e d . M o r e o v e r , t r e a t m e n t o f i n t a c t a c i n a r c e l l s w i t h t h e s l o w l y p e n e t r a t i n g c o v a l e n t r e a g e n t , d i a z o t i z e d s u l p h a n i l i c a c i d ( D S A ) d e s t r o y e d a b o u t 90% o f t h e t o t a l A T P a s e a c t i v i t y p r e s e n t i n p a n c r e a t i c p l a s m a m e m b r a n e s ( H a m l y n a n d S e n i o r 1 9 8 3 ) . T h i s c o u l d s u g g e s t t h a t t h e r e may be a p o o l o f p l a s m a memb rane A T P a s e t h a t was n o t a c c e s s i b l e t o t h e e x t e r n a l l y a p p l i e d p r o b e . n i I n a d d i t i o n t o t h e z y m o g e n g r a n u l e C a - A T P a s e r e p o r t e d ( B e a u d o i n e_t a l 1 9 8 0 ) , P o n n a p p a e t a l ( 1 9 8 1 ) h a v e d e s c r i b e d a C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y a s s o c i a t e d w i t h m i c r o s o m a l p r e p a r a t i o n s o b t a i n e d f r o m a c i n a r c e l l s . I t I s p o s s i b l e t h a t t h i s a c t i v i t y r e p r e s e n t s c o n t a m i n a t i o n f r o m p l a s m a 2-4-m e m b r a n e s p r e s e n t i n t h i s f r a c t i o n . A n i n d i g e n o u s C a - A T P a s e a c t i v i t y t h o u g h may be p r e s e n t a s t h e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e a c t i v i t y d e s c r i b e d b y P o n n a p p a e_t a l^ ( 1 9 8 1 ) a p p e a r d i f f e r e n t f r o m t h a t a c t i v i t y a s s o c i a t e d w i t h t h e p l a s m a membrane o b s e r v e d i n t h e c u r r e n t w o r k : T h e m i c r o s o m a l 2-4-C a - A T P a s e a c t i v i t y was n o t s t i m u l a t e d b y c a l m o d u l i n ( W i l l i a m s , 2-4-p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) a n d t h e h i g h Mg - s t i m u l a t i o n o f t h e p l a s m a m e m b r a n e - r e l a t e d a c t i v i t y was n o t o b s e r v e d . 2-4-T h u s i n a d d i t i o n t o t h e p l a s m a memb rane Ca - A T P a s e s y s t e m 2_i_ d e s c r i b e d , t h e a c i n a r c e l l may a l s o p o s s e s s a m i c r o s o m a l C a - A T P a s e p o s s i b l y a s s o c i a t e d w i t h t h e e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m o r m i t o c h o n d r i a l a c t i v i t y a n d a z y m o g e n g r a n u l e s y s t e m . T h e p r e s e n c e o f e c t o - A T P a s e s h a v e b e e n r e p o r t e d i n p l a t e l e t s ( C h a m b e r s e t a l 1 9 6 7 ) , p o l y m o r p h o n u c l e a r l e u c o c y t e s (De P i e r r e a n d - 153 -K a r n o v s k y 1 9 7 4 ) , m a s t c e l l s ( C o o p e r a n d S t a n w o r t h 1 9 7 6 ) , a n d r a t mammary g l a n d c e l l s ( C a r r a w a y _ _ _ _ _ 1 9 8 0 ) . D e s p i t e t h e i r w i d e s p r e a d o c c u r r e n c e , t h e p h y s i o l o g i c a l f u n c t i o n o f t h e e c t o - A T P a s e s i s n o t c l e a r . I t h a s b e e n s u g g e s t e d t h a t t h e e c t o - A T P a s e s may p r o v i d e a m e c h a n i s m f o r t h e t e r m i n a t i o n o f t h e A T P s i g n a l i n p r o c e s s e s w h e r e ATP may be a c t i n g a s a n e u r o t r a n s m i t t e r ( C a r r a w a y _ _ _ _ _ 1 9 8 0 ) . R e c e n t l y , G a l l a c h e r ( 1 9 8 2 ) s h o w e d t h a t e x t e r n a l ATP c a n s t i m u l a t e a m y l a s e r e l e a s e f r o m s u p e r f u s e d mouse p a r o t i d g l a n d s i n t h e p r e s e n c e o f a t r o p i n e , p h e n t o l a m i n e a n d p r o p r a n o l o l , a n e f f e c t w h i c h c a n be b l o c k e d b y q u i n i d i n e . A l t h o u g h t h i s i s a n i n t e r e s t i n g o b s e r v a t i o n , f u r t h e r w o r k i s r e q u i r e d t o e s t a b l i s h t h e r o l e o f ATP a s a s e c r e t a g o g u e o f a m y l a s e s e c r e t i o n . I t i s now k n o w n t h a t c a l c i u m f l u x e s d u r i n g s e c r e t a g o g u e - s t i m u l a t e d 2+ e n z y m e s e c r e t i o n a r e b i p h a s i c . T h e r e i s a n i n i t i a l C a - e x t r u s i o n f r o m t h e c e l l d u e t o r e l e a s e f r o m i n t r a c e l l u l a r s t o r e s ( M a t t h e w s e _ a l 1 9 7 3 ; C a s e a n d C l a u s e n 1 9 7 3 ) , f o l l o w e d b y a r e u p t a k e p h a s e ( K o n d o a n d S c h u l z 1976 a a n d b ) i n t o a n i n t r a c e l l u l a r c o m p a r t m e n t d i f f e r e n t f r o m t h e t r i g g e r p o o l ( S t o l z e a n d S c h u l z 1 9 8 0 ) . A l t h o u g h t h e p r e s e n c e o f a n A T P - d e p e n d e n t c a l c i u m s e q u e s t r a t i o n i n m i t o c h o n d r i a a n d r o u g h e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m h a s b e e n r e c o g n i z e d ( P o n n a p p a et_ a l 1 9 8 1 ; W a k a s u g i e t a l 1 9 8 2 ) l i t t l e i s k n o w n a b o u t C a 2 + - t r a n s p o r t p r o c e s s e s a t t h e l e v e l 2+ o f t h e p l a s m a m e m b r a n e . I n v i e w o f t h e b i d i r e c t i o n a l C a f l u x e s 2+ r e p o r t e d i n i n t a c t c e l l s , b o t h A T P - d e p e n d e n t Ca e f f l u x f r o m p r e - l o a d e d 2+ v e s i c l e s a n d A T P - d e p e n d e n t C a - i n f l u x w e r e m e a s u r e d i n t h e s e p r e s e n t k5 s t u d i e s . T h e Ca e f f l u x o b s e r v e d i n p r e l o a d e d v e s i c l e s r e p r e s e n t e d t h e r e l e a s e o f C a s e q u e s t e r e d s i n c e L a ( 1 . 2 mM) p r e s e n t i n t h e w a s h i n g - 154 -m e d i u m w o u l d d i s p l a c e b o u n d c a l c i u m . M o r e o v e r , Ca + e f f l u x f r o m p r e l o a d e d v e s i c l e s wa s c o n s i d e r a b l y r e d u c e d w h e n v e s i c l e s w e r e p r e l o a d e d i n t h e p r e s e n c e o f o x a l a t e . I t was r e c o g n i z e d , t h o u g h t h a t t h e r e was a c o n s i d e r a b l e d e g r e e o f c a l c i u m b i n d i n g w h i c h h a d t h e t e n d e n c y t o o b s c u r e 24- 2-4-A T P - d e p e n d e n t Ca T i n f l u x . Ca - u p t a k e t h o u g h , was c o n s i s t e n t l y o b s e r v e d when t h e v e s i c l e s w e r e t r a n s f e r r e d t o a n EGTA c o n t a i n i n g b u f f e r b e f o r e M i l l i p o r e f i l t r a t i o n . T h i s A T P - d e p e n d e n t C a 2 + - u p t a k e was a b o l i s h e d i n t h e p r e s e n c e o f c a l c i u m i o n o p h o r e i n d i c a t i n g t h a t c a l c i u m wa s s e q u e s t e r e d i n t o v e s i c l e s a n d n o t j u s t b o u n d t o t h e s u r f a c e o f t h e v e s i c l e s . K r i b b e n e t aj^ ( 1 9 8 3 ) h a v e a l s o r e p o r t e d a n A T P - d e p e n d e n t 2+ C a - u p t a k e i n p a n c r e a t i c p l a s m a membrane p r e p a r a t i o n s . A s i n t h e 24-o b s e r v a t i o n s o f K r i b b e n et^ a j l ( 1 9 8 3 ) , Ca - u p t a k e wa s f o u n d t o b e 24-Mg - d e p e n d e n t a l t h o u g h some l e v e l o f u p t a k e was o b s e r v e d i n t h e a b s e n c e o f a d d e d Mg ( F i g . 2 9 ) . H o w e v e r , t h e c a l c i u m c o n c e n t r a t i o n s u s e d i n t h e s e s t u d i e s w e r e much h i g h e r t h a n t h o s e u s e d b y K r i b b e n j i t j a l ( 1 9 8 3 ) . P o n n a p p a et^ a l^ ( 1 9 8 1 ) r e p o r t e d t h e p r e s e n c e o f C a - t r a n s p o r t p r o c e s s e s i n b o t h m i c r o s o m a l a n d p l a s m a membrane p r e p a r a t i o n s . I t t h u s a p p e a r s 24-t h a t , s i m i l a r t o c o n t r a c t i l e s y s t e m s , t h e r e g u l a t i o n o f c y t o s o l i c Ca i n t h e a c i n a r c e l l may be a f u n c t i o n o f b o t h a ' m i c r o s o m a l ' ( p o s s i b l y e n d o p l a s m i c r e t i c u l u m ) C a - u p t a k e s y s t e m a n d a p l a s m a - m e m b r a n e 24-A T P - d e p e n d e n t Ca e x t r u s i o n s y s t e m . 24-T h e g r e a t m a j o r i t y o f t h e v e s i c l e s u s e d i n t h e Ca - f l u x s t u d i e s s e a l e d r i g h t - s i d e o u t a s 95% o r m o r e o f t h e A T P a s e a c t i v i t y a p p e a r e d a c c e s s i b l e f r o m t h e o u t s i d e , s i m i l a r t o t h e o r i e n t a t i o n o b s e r v e d i n t h e I n t a c t c e l l s . B a s e d o n t h e p r e s e n c e o f a C a 2 + u p t a k e s y s t e m i n t h e - 155 -v e s i c l e p r e p a r a t i o n s , i t i s t e m p t i n g t o s p e c u l a t e t h a t s u c h a s y s t e m may a l s o e x i s t i n i n t a c t c e l l s . A n u m b e r o f p r o b l e m s w i t h t h i s a s s u m p t i o n a r e w o r t h c o n s i d e r i n g . F i r s t l y , C a 2 + i n t h i s s i t u a t i o n w o u l d be m o v i n g down a n e l e c t r o c h e m i c a l g r a d i e n t s o a n A T P - d e p e n d e n t u p t a k e w o u l d n o t b e n o r m a l l y r e q u i r e d . S e c o n d l y , t h e a c i n a r memb rane a p p e a r s t o be 2-4-a d e q u a t e l y p e r m e a b l e t o Ca . T h e r e f o r e a n a c t i v e p r o c e s s d o e s n o t a p p e a r t o be n e c e s s a r y . T h i r d l y , t h e s o u r c e o f t h e e x t r a c e l l u l a r ATP i s u n c e r t a i n , t h o u g h t h e r e i s e v i d e n c e t h a t ATP may be t r a n s l o c a t e d f r o m t h e c y t o s o l t o t h e c e l l e x t e r i o r ( T r a n s 1 9 7 4 ) . I t i s k n o w n t h a t z y m o g e n g r a n u l e s c o n t a i n ATP ( G r i n s t e i n , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) a n d c a l m o d u l i n ( H e i s l e r , p e r s o n a l c o m m u n i c a t i o n ) . T h e r e f o r e e x o c y t o s i s o f z y m o g e n g r a n u l e s c o u l d r e l e a s e t h e s e e f f e c t o r s t o t h e e x t e r i o r o f t h e a c i n a r c e l l . C a l c i u m i n f l u x I n t o r e d b l o o d c e l l s h a s b e e n d e m o n s t r a t e d a f t e r i n h i b i t i n g t h e o u t w a r d t r a n s p o r t o f c a l c i u m by v a n a d a t e ( V e r e c k a a n d C a r a f o l i 1 9 8 2 ) . T h i s c a l c i u m i n f l u x was s h o w n t o be c a r r i e r - m e d i a t e d s i n c e i t was s a t u r a b l e , K + s e n s i t i v e a n d was i n h i b i t e d b y v e r a p a m i l , q u i n i d i n e a n d Co ( V e r e c k a a n d C a r a f o l i 1 9 8 2 ) . S i m i l a r l y , i t h a s b e e n s h o w n t h a t p r o v i s i o n o f r e s p i r a t o r y e n e r g y s u p p o r t s c a l c i u m a c c u m u l a t i o n i n i s o l a t e d h e p a t o c y t e s ( K l e i n e k e a n d S t r a t m a n 1 9 7 4 ; D u b i n s k y a n d C o c k r e l l 1 9 7 5 ) . T h e s e o b s e r v a t i o n s s u g g e s t t h a t , i n r e s t i n g c e l l s , a 2-4-s l o w c y c l i n g o f C a a c r o s s t h e p l a s m a memb rane o c c u r s . T h i s p h e n o m e n o n t h o u g h , h a s n o t b e e n d e m o n s t r a t e d i n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . T h e r e g u l a t o r y r o l e o f c a l c i u m i n c e l l u l a r f u n c t i o n s d e p e n d s o n t h e m a i n t e n a n c e o f l o w c o n c e n t r a t i o n s o f c y t o s o l i c c a l c i u m . S t u d i e s b y - 156 -S c h u l z a n d H e i l ( 1 9 7 9 ) h a v e i n d i c a t e d t h a t t h e N a + / C a + e x c h a n g e s y s t e m may be r e s p o n s i b l e a t l e a s t i n p a r t f o r c a l c i u m e x t r u s i o n f r o m a c i n a r c e l l s . I t i s k n o w n t h a t t h e s e c r e t o r y p r o t e i n s i n t h e p a n c r e a t i c f l u i d 2+ 2+ a r e a c c o m p a n i e d by a c o n s t a n t a m o u n t o f C a a n d Mg ( B e a u d o i n e _ a l 1 9 8 0 ) . T h e Ca - s e c r e t o r y p r o t e i n a s s o c i a t i o n p r e s u m a b l y t a k e s p l a c e d u r i n g m a t u r a t i o n o f t h e s e c r e t o r y v e s i c l e s . T h o u g h a p o s s i b l e c a l c i u m e x t r u s i o n m e c h a n i s m , t h e t i m e c o u r s e o f s u c h a n e v e n t i s s u c h t h a t i t may n o t be a m a j o r c o m p o n e n t o f t h e c a l c i u m e x t r u s i o n p r o c e s s . 2+ 2+ T h e e c t o - M g o r C a - A T P a s e p r e s e n t i n a c i n a r p r e p a r a t i o n s e n r i c h e d i n p l a s m a m e m b r a n e s r e p r e s e n t s t h e m a j o r ATP h y d r o l y z i n g a c t i v i t y i n t h e 2+ p a n c r e a s . U n l i k e o t h e r p l a s m a membrane C a - A T P a s e s t h a t p l a y a n i m p o r t a n t r o l e I n t h e m a i n t e n a n c e o f i n t r a c e l l u l a r c a l c i u m c o n c e n t r a t i o n s , t h i s e n z y m e s y s t e m by v i r t u e o f t h e o r i e n t a t i o n o f i t s c a t a l y t i c s i t e d o e s n o t a p p e a r t o s h a r e t h i s p r o p e r t y . The C a 2 + - A T P a s e a c t i v i t y c h a r a c t e r i z e d , t h o u g h , h a s many s i m i l a r p r o p e r t i e s t o o t h e r 2+ Ca - t r a n s p o r t A T P a s e s i n c l u d i n g s t i m u l a t i o n by c a l m o d u l i n a n d a c i d i c p h o s p h o l i p i d s , a C a - d e p e n d e n t - h y d r o x y l a m i n e s e n s i t i v e p h o s p h o r y l a t e d i n t e r m e d i a t e a n d a n a f f i n i t y f o r c a l c i u m i n t h e m i c r o m o l a r r a n g e . I n a d d i t i o n , t h i s a c t i v i t y h a s p r o p e r t i e s s i m i l a r t o o t h e r 2+ A T P - d i p h o s p h o l y d r o l a s e s i n c l u d i n g h i g h Mg - s e n s i t i v i t y , u t i l i z a t i o n o f ADP a s s u b s t r a t e a n d t h e p r e s e n c e o f i t s c a t a l y t i c s i t e o n t h e o u t s i d e o f t h e c e l l s u r f a c e . I t i s n o t k n o w n w h e t h e r t h e e n z y m e s p a n s t h e p l a s m a memb rane o r i f t h i s t o t a l a c t i v i t y r e p r e s e n t s t h e p r e s e n c e o f b o t h a h i g h a n d l o w a f f i n i t y s y s t e m w i t h s e p a r a t e f u n c t i o n s . 2+ 2+ T h e e c t o p i c n a t u r e o f t h e C a o r Mg - A T P a s e a c t i v i t y c h a r a c t e r i z e d - 157 -o p e n s t o q u e s t i o n t h e p o s s i b l e m e c h a n i s m ( s ) o f r e g u l a t i o n a n d f u n c t i o n o f t h i s e n z y m e . F o r e x a m p l e , w h a t w o u l d be t h e p o s s i b l e s o u r c e o f 2+ c a l m o d u l i n a n d s i n c e e x t r a c e l l u l a r C a i s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n 2+ i n t r a c e l l u l a r Ca , w h a t w o u l d be t h e f u n c t i o n o f a h i g h a f f i n i t y 2+ C a - A T P a s e u n d e r t h e s e c o n d i t i o n s ? One p o s s i b i l i t y i s t h a t t h i s - , s y s t e m f u n c t i o n s a s a s i g n a l t o o t h e r e v e n t s f o l l o w i n g e x o c y t o s i s . C a l m o d u l n p r e s e n t i n z y m o g e n g r a n u l e s a n d / o r r e l e a s e d b y e x o c y t o s i s may b i n d t o 2+ Ca - A T P a s e s i t e s l e a d i n g t o a l o c a l i z e d t r a n s p o r t t h a t may e f f e c t t h e 2+ n e x t e v e n t . T h e C a l e v e l s i n t h e s e c r e t o r y d u c t s ( e x t r a c e l l u l a r t o a c i n a r c e l l s ) a r e n o t c o n s t a n t b u t a r e a l t e r e d a t v a r i o u s s t a g e s i n t h e 2+ s e c r e t i o n c y c l e . T h e r e f o r e t h e a c t i v i t y o f t h e C a - A T P a s e may v a r y 2+ d e p e n d i n g on t h e e n v i r o n m e n t a l C a . O f s i g n i f i c a n t i m p o r t a n c e i s t h e e x a c t l o c a l i z a t i o n o f t h i s 2+ C a T - A T P a s e : I t i s n o t k n o w n i f t h i s a c t i v i t y i s p r e s e n t on t h e b a s o l a t e r a l o r l u m i n a l membrane o f t h e a c i n a r c e l l . T h e a v a i l a b i l i t y o f t h i s i n f o r m a t i o n w i l l be o f v a l u e i n s p e c u l a t i n g on t h e i n t e r a c t i o n o f t h e A T P a s e w i t h o t h e r e v e n t s i n t h e s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g p r o c e s s . - 158 -BIBLIOGRAPHY A d u n y a h , E . S . , N i g g l i , V . a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 8 2 ) T h e a n t i c a l m o d u l i n d r u g s t r i f l u o p e r a z i n e a^d R 2 4 5 7 1 r e m o v e t h e a c t i v a t i o n o f t h e p u r i f i e d e r y t h r o c y t e Ca + - A T P a s e b y a c i d i c p h o s p h o l i p i d s a n d b y c o n t r o l l e d p r o t e o l y s i s . FEBS L e t t . 1 4 3 , 6 5 - 6 8 . A k y e m p o n , C . K . a n d R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 2 ) The s t o i c h i o m e t r y , o f t h e Ca + pump i n human e r y t h r o c y t e v e s i c l e s : m o d u l a t i o n b y Ca + , Mg + a n d c a l m o d u l i n . C e l l C a l c i u m 3 , 1 - 1 7 . A l b a n o , J . , B h o o l a , K . D . , a n d H a r v e y , R . F . ( 1 9 7 6 ) I n t r a c e l l u l a r m e s s e n g e r r o l e o f c y c l i c GMP i n e x o c r i n e p a n c r e a s . N a t u r e 2 6 2 , 4 0 4 - 4 0 6 . A l - J o b o r e , A . a n d R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 1 a ) I n f l u e n c e o f EGTA on t h e a p p a r e n t C a + a f f i n i t y o f Mg + - d e p e n d e n t , Ca + - s t i m u l a t e d A T P a s e I n t h e human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t 6 4 5 , 1 - 9 . A l - J o b o r e , A . a n d R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 1 b ) P h o s p h o l i p i d a n d c a l m o d u l i n a c t i v a t i o n o f s o l u b i l i z e d C a t r a n s p o r t A T P a s e f r o m human e r y t h r o c y t e s : r e g u l a t i o n b y m a g n e s i u m . C a n . J . B i o c h e m . 5 9 , 8 8 0 - 8 8 8 . A n a n d - S r ^ v a s t a v a , 2 M . B . , P a n a g i a , V . a n d D h a l l a , N . S . ( 1 9 8 2 ) P r o p e r t i e s o f Ca + - o r Mg + - D e p e n d e n t A T P a s e i n r a t h e a r t s a r c o l e m m a . A d v . M y o c a r d i o l . 3 , 3 5 9 - 3 7 1 . A r g e n t , B . E . , C a s e , R . M . a n d S c r a t c h e r d , T . ( 1 9 7 3 ) A m y l a s e s e c r e t i o n b y t h e p e r f u s e d c a t p a n c r e a s i n r e l a t i o n t o t h e s e c r e t i o n o f c a l c i u m a n d o t h e r e l e c t r o l y t e s a n d a s i n f l u e n c e d b y t h e e x t e r n a l i o n i c e n v i r o n m e n t . J . P h y s i o l . 2 3 0 , 5 7 5 - 5 9 3 . A r g e n t , B . E . , S m i t h , R . K . a n d C a s e , R . M . ( 1 9 7 5 ) T h e d i s t r i b u t i o n o f b i v a l e n t - c a t i o n - s t i m u l a t e d a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t e h y d r o l y s i s a n d c a l c i u m a c c u m u l a t i o n i n s u b c e l l u l a r f r a c t i o n s o f r a t p a n c r e a s . B i o c h e m . S o c . T r a n s . 3 , 7 1 3 - 7 1 4 . A u , K . S . ( 1 9 7 8 ) A n e n d o g e n o u s i n h i b i t o r o f e r y t h r o c y t e membrane ( C a 2 + + M g 2 + ) - A T P a s e . I n t . J . B i o c h e m . 9 , 4 7 7 - 4 8 0 . B a u d u i n , H . a n d C a n t r a i n e , F . ( 1 9 7 2 ) " P h o s p h o l i p i d e f f e c t " a n d s e c r e t i o n i n t h e r a t p a n c r e a s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 2 7 0 , 2 4 8 - 2 5 3 . B e a u d o i n , A . R . , L a l i b e r t e , J . F . , L e B e l , D . , L o r d , A . , G r o n d i n , G . , P h a n e u f , S . a n d S t - J e a n , P . ( 1 9 8 0 ) L o c a l i z a t i o n a n d p h y s i o l o g i c a l r o l e o f t h e A T P - d i p h o s p h o h y d r o l a s e i n t h e p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l . I n : B i o l o g y o f N o r m a l a n d C a n c e r o u s E x o c r i n e P a n c r e a t i c C e l l s . R i b e t A . , P r a d a y r o l , L . a n d S u s i n i , C . e d s . p p . 2 7 3 - 2 8 0 . E l s e v i e r / N o r t h -H o l l a n d , A m s t e r d a m . B e a u d o i n , A . R . , V a c h e r e a u , A . a n d S t - J e a n , P . ( 1 9 8 3 ) . E v i d e n c e t h a t a m y l a s e i s r e l e a s e d f r o m two d i s t i n c t p o o l s o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n t h e p a n c r e a s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 7 5 7 , 3 0 2 - 3 0 5 . - 159 -B e l l e , H . V . ( 1 9 8 1 ) . R 2 4 5 7 1 : A p o t e n t i n h i b i t o r o f c a l m o d u l i n -a c t i v a t e d e n z y m e s . C e l l C a l c i u m 2 , 4 8 3 - 4 9 4 . B e n z , L . , E c k s t e i n , B . , M a t t h e w s , E . K . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 7 2 ) C o n t r o l o f p a n c r e a t i c a m y l a s e r e l e a s e i n v i t r o : e f f e c t s o f i o n s , c y c l i c AMP a n d c o l c h i c i n e , B r . J . P h a r m a c o l . 4 6 , 6 6 - 7 7 . B i e g e r , W . , S e y b o l d , S . a n d K e r n , H . ( 1 9 7 6 ) S t u d i e s on i n t r a c e l l u l a r t r a n s p o r t o f t h e s e c r e t o r y p r o t e i n s i n r a t e x o c r i n e p a n c r e a s . C e l l T i s s u e R e s . 1 7 0 , 2 0 3 - 2 1 9 . B o m m e l a e r , G . , R o z e n t a l , G . , L a v a l , J . , S e n a r e n s , C , V o y s s e , N . , a n d R i b e t , A . ( 1 9 8 0 ) R e g u l a t i o n o f a m y l a s e r e l e a s e b y d o g p a n c r e a t i c a c i n i . I n : B i o l o g y o f N o r m a l a n d C a n c e r o u s E x o c r i n e P a n c r e a t i c C e l l s . R i b e t , A . , P r a d a y r o l , L . , S u s i n i , C . e d s . p p . 1 9 - 2 5 E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d , A m s t e r d a m . B o n d , G . H . a n d C l o u g h , D . L . ( 1 9 7 3 ) A s o l u b l e p r o t e i n a c t i v a t o r o f ( M g 2 + + C a 2 + ) - d e p e n d e n t A T P a s e i n human r e d c e l l m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 3 2 3 , 5 9 2 - 5 9 9 . B r o s t r o m , C O . , B r o s t r o m , M . A . a n d W o l f f , D . J . ( 1 9 7 7 ) C a l c i u m d e p e n d e n t a d e n y l a t e c y c l a s e f r o m r a t c e r e b r a l c o r t e x . R e v e r s i b l e a c t i v a t i o n b y s o d i u m f l u o r i d e . J . B i o l . C h e m . 2 5 2 , 5 6 7 7 - 5 6 8 5 . B r o s t r o m , C O . a n d W o l f f , D . G . ( 1 9 8 1 ) P r o p e r t i e s a n d f u n c t i o n s o f c a l m o d u l i n . B i o c h e m . P h a r m a c o l . 3 0 , 1 3 9 5 - 1 4 0 5 . B u r n h a m , D . B . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 8 2 ) E f f e c t s o f c a r b a c h o l , a n d i n s u l i n o n p r o t e i n p h o s p h o r y l a t i o n i n i s o l a t e d p a n c r e a t i c a c i n i . J . B i o l . Chem . 2 5 7 , 1 0 5 2 3 - 1 0 5 2 8 . C a l d e r o n , P . , F u r n e l l e , J . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 8 0 ) P h o s p h a t i d y l i n o s i t o l t u r n o v e r a n d c a l c i u m movemen t i n t h e r a t p a n c r e a s . Am . J . P h y s i o l . 2 3 8 , G 2 4 7 - G 2 5 4 . C a r a f o l i , E . , Z u r i n i , M . , N i g g l i , V . a n d K r e b s , J . ( 1 9 8 2 ) T h e c a l c i u m - t r a n s p o r t i n g A T P a s e o f e r y t h r o c y t e s . A n n . N . Y . A c a d . S c i . 4 0 2 , 3 0 4 - 3 2 8 . C a r l i n , R . K . , G r a b , D . J . a n d S i e k e v i t z , P . ( 1 9 8 1 ) F u n c t i o n o f c a l m o d u l i n i n p o s t s y n a p t i c d e n s i t i e s . I I I . C a l m o d u l i n - b i n d i n g p r o t e i n s o f t h e p o s t s y n a p t i c d e n s i t y . J . C e l l . B i o l . 8 9 , 4 4 9 - 4 5 5 . C a r o n i , P . a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 8 1 ) T h e C a 2 + - p u m p i n g A T P a s e o f h e a r t s a r c o l e m m a . C h a r a c t e r i z a t i o n , c a l m o d u l i n d e p e n d e n c e , a n d p a r t i a l p u r i f i c a t i o n . J . B i o l . Chem . 2 5 6 , 3 2 6 3 - 3 2 7 0 . C a r o n i , P . , Z u r i n i , M . a n d C l a r k , A . ( 1 9 8 2 ) . T h e c a l c i u m - p u m p i n g A T P a s e o f h e a r t s a r c o l e m m a . A n n . N . Y . A c a d . S c i . 4 0 2 , 4 0 2 - 4 2 1 . - 160 -C a r r a w a y , C . A . C . , C o r r a d o , F . J . , F o g l e , D . D . a n d C a r r a w a y , K . L . ( 1 9 8 0 ) E c t o - e n z y m e s o f mammary g l a n d a n d i t s t u m o u r s . Ca + o r Mg + - s t i m u l a t e d a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e a n d i t s p e r t u r b a t i o n b y c o n c a n a v a l i n A . B i o c h e m . J . 1 9 1 , 4 5 - 5 1 . C a s e , R . M . ( 1 9 7 8 ) S y n t h e s i s , i n t r a c e l l u l a r t r a n s p o r t a n d d i s c h a r g e o f e x p o r t a b l e p r o t e i n s i n t h e p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l a n d o t h e r c e l l s . B i o l . R e v . 5 3 , 2 1 1 - 3 5 4 . C a s e , R . M . , C h a r l t o n , M . , S m i t h , P . A . a n d S c r a t c h e r d , T . ( 1 9 8 0 ) E l e c t r o l y t e s e c r e t o r y p r o c e s e s i n e x o c r i n e p a n c r e a s a n d t h e i r i n t r a c e l l u l a r c o n t r o l . I n : B i o l o g y o f N o r m a l a n d C a n c e r o u s E x o c r i n e P a n c r e a t i c C e l l s . R i b e t , A . , P r a d a y r o l L . , S u s i n i , C . e d s . p p . 4 1 - 5 4 . E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d , A m s t e r d a m . C a s e , R . M . , a n d C l a u s e n , T . ( 1 9 7 3 ) T h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n c a l c i u m e x c h a n g e a n d e n z y m e s e c r e t i o n i n t h e i s o l a t e d r a t p a n c r e a s . J . P h y s i o l . 2 3 5 , 7 5 - 1 0 2 . C a s s e l , D. a n d S e l i n g e r , Z . ( 1 9 7 7 ) M e c h a n i s m o f a d e n y l a t e c y c l a s e a c t i v a t i o n b y c h o l e r a t o x i n : I n h i b i t i o n o f GTP h y d r o l y s i s a t t h e r e g u l a t o r y s i t e . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U S A , 7 4 , 3 3 0 7 - 3 3 1 1 . C h a m b e r s , D . A . , S a l z m a n , E . W . a n d N e r i , L . L . ( 1 9 6 7 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f " E c t o - A T P a s e " o f human b l o o d p l a t e l e t s . A r c h . B i o c h e m . B i o p h y s . 1 1 9 , 1 7 3 - 1 7 8 . C h a n d l e r , D . E . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 7 8 a ) I n t r a c e l l u l a r d i v a l e n t c a t i o n r e l e a s e i n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s d u r i n g s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g . I : U s e o f c h l o r o t e t r a c y c l i n e a s a f l u o r e s c e n t p r o b e . J . C e l l B i o l . 7 6 , 3 7 1 - 3 8 5 . C h a n d l e r , D . E . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 7 8 b ) I n t r a c e l l u l a r d i v a l e n t c a t i o n r e l e a s e i n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s d u r i n g s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g . I I : S u b c e l l u l a r l o c a l i z a t i o n o f t h e f l u o r e s c e n t p r o b e c h l o r o t e t r a c y c l i n e . J . C e l l B i o l . 7 6 , 3 8 6 - 3 9 9 . C h a n d l e r , D . E . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 7 4 ) P a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s : E f f e c t s o f l a n t h a n u m i o n s o n a m y l a s e r e l e a s e a n d c a l c i u m i o n f l u x e s . J . P h y s i o l . 2 4 3 , 8 3 1 - 8 4 6 . C h a u v e l o t , L . , H e i s l e r , S . , H u o t , J . a n d G a g n o n , D . ( 1 9 7 9 ) P r o s t a g l a n d i n s a n d e n z y m e s e c r e t i o n f r o m d i s p e r s e d r a t p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . L i f e S c i . 2 5 , 9 1 3 - 9 2 0 . C h e u n g . W . Y . , L y n c h , T . J . a n d W a l l a c e , R .W . ( 1 9 7 8 ) A n e n d o g e n o u s Ca + - d e p e n d e n t a c t i v a t o r p r o t e i n o f b r a i n a d e n y l a t e c y c l a s e a n d c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . A d v . C y c l i c N u c l e o t i d e R e s . 9 , 2 3 3 - 2 5 1 . - 161 -C h i l d e r s , S . R . a n d S i e g e l , F . L . ( 1 9 7 5 ) I s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f c a l c i u m b i n d i n g p r o t e i n f r o m e l e c t r o p l a x o f e l e c t r o p h o r u s e l e c t r i c u s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 4 0 5 , 9 9 - 1 0 8 . C h r i s t o p h e , J . , C a l d e r o n - A t t a s , P . , D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . , L a m b e r t , M . , R o b b e r e c h t , P . , S v o b o d a , M . , V a n d e r m e e r s , A . , V a n d e r m e e r s - P i r e t , M . a n d W i n a n d , J . ( 1 9 8 0 ) S t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g i n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s e x p o s e d t o p a n c r e o z y m i n : m e m b r a n o u s a n d i n t r a c e l l u l a r p h e n o m e n a . I n : B i o l o g y o f N o r m a l a n d C a n c e r o u s E x o c r i n e P a n c r e a t i c C e l l s . R i b e t A . , P r a d a y r o l , L . , S u s i n i s , C e d s . p p . 1 0 3 - 1 1 8 . E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d A m s t e r d a m . C h r i s t o p h e , J . P . , C o n l o n , T . P . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 6 ) I n t e r a c t i o n o f p o r c i n e v a s o a c t i v e i n t e s t i n a l p e p t i d e w i t h d i s p e r s e d p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s f r o m t h e g u i n e a p i g . B i n d i n g o f r a d i o i o d i n a t e d p e p t i d e . J . B i o l . C h e m . 2 5 1 , 4629 - 4634 . C h r i s t o p h e , J . P . , F r a n d s e n , E . K . , C o n l o n , T . P . , K r i s h n a , G . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 6 ) A c t i o n o f c h o l e c y s t o k i n i n , c h o l i n e r g i c a g e n t s , a n d A - 2 3 1 8 7 on a c c u m u l a t i o n o f g u a n o s i n e 3 1 : 5 ' - m o n o - p h o s p h a t e i n d i s p e r s e d g u i n e a p i g p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . J . B i o l . C hem . 2 5 1 , 4 6 4 0 - 4 6 4 5 . C l e m e n t e , F . a n d M e d o l e s i , J . ( 1 9 7 5 a ) C a l c i u m a n d p a n c r e a t i c s e c r e t i o n . I : S u b c e l l u l a r d i s t r i b u t i o n o f c a l c i u m a n d m a g n e s i u m i n t h e e x o c r i n e p a n c r e a s o f t h e g u i n e a p i g . J . C e l l B i o l . 6 5 , 8 8 - 1 0 2 . C l e m e n t e , F . a n d M e l d o l e s i , J . ( 1 9 7 5 b ) C a l c i u m a n d p a n c r e a t i c s e c r e t i o n - d y n a m i c s o f s u b c e l l u l a r c a l c i u m p o o l s i n r e s t i n g a n d s t i m u l a t e d a c i n a r c e l l s . B r . J . P h a r m a c o l . 5 5 , 3 6 9 - 3 7 9 . C o o p e r , P . H . a n d S t a n w o r t h , D . R . ( 1 9 7 6 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f c a l c i u m - i o n - a c t i v a t e d a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e i n t h e p l a s m a memb rane o f r a t m a s t c e l l s . B i o c h e m . J . 1 5 6 , 6 9 1 - 7 0 0 . D a g o m , J . C . ( 1 9 7 8 ) N o n - p a r a l l e l e n z y m e s e c r e t i o n f r o m r a t p a n c r e a s : i n v i v o s t u d i e s . J . P h y s i o l . 2 8 0 , 4 3 5 - 4 4 8 . D a n i e l s s o n , A . a n d S e h l i n , J . ( 1 9 7 4 ) T r a n s p o r t a n d o x i d a t i o n o f a m i n o a c i d s a n d g l u c o s e i n t h e i s o l a t e d e x o c r i n e mouse p a n c r e a s : E f f e c t s o f i n s u l i n a n d p a n c r e o z y m i n . A c t a P h y s i o l . S c a n d . 9 1 , 5 5 7 - 5 6 5 . D e d m a n , J . R . , P o t t e r , J . D . , J a c k s o n , R . L . , J o h n s o n , J . D . a n d M e a n s , A . R . ( 1 9 7 7 ) P h y s i c o c h e m i c a l p r o p e r t i e s o f r a t t e s t i s C a 2 + - d e p e n d e n t r e g u l a t o r p r o t e i n o f c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . R e l a t i o n s h i p o f C a 2 + b i n d i n g , c o n f o r m a t i o n a l c h a n g e s , a n d p h o s p h o d i e s t e r a s e a c t i v i t y . J . B i o l . C hem . 2 5 2 , 8 4 1 5 - 8 4 2 2 . - 162 -D e L o r e n z o , R . J . , F r e e d m a n , S . D . , Y o h e , W . B . a n d M a u r e r , S . C . ( 1 9 7 9 ) . S t i m u l a t i o n o f C a 2 + - d e p e n d e n t n e u r o t r a n s m i t t e r r e l e a s e a n d p r e s y n a p t i c n e r v e t e r m i n a l p r o t e i n p h o s p h o r y l a t i o n b y c a l m o d u l i n a n d a c a l m o d u l i n - l i k e p r o t e i n i s o l a t e d f r o m s y n a p t i c v e s i c l e s . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . , U . S . A . 7 6 , 1 8 3 8 - 1 8 4 2 . D e P i e r r e , J . W . a n d K a r n o v s k y , M . L . ( 1 9 7 4 ) E c t o - e n z y m e s o f t h e g u i n e a p i g p o l y m o r p h o n u c l e a r l e u k o c y t e . I : E v i d e n c e f o r a n e c t o - a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t a s e , - a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e a n d p - n i t r o p h e n y l p h o s p h a t a s e . J . B i o l . C h e m . 2 4 9 , 7 1 1 1 - 7 1 2 0 . De P o n t , J . J . H . H . M . , K e m p e n , H . J . a n d B o n t i n g , S . L . ( 1 9 7 7 ) H o r m o n a l a c t i v a t i o n o f a d e n y l a t e c y c l a s e a n d i t s e f f e c t s i n e x o c r i n e p a n c r e a t i c f u n c t i o n . I n : H o r m o n a l R e c e p t o r s i n D i g e s t i v e T r a c t P h y s i o l o g y . B o n f i l s , S . , F r o m a g e o t , P . , R o s s e l i n , G . e d s . p p . 2 8 9 - 3 0 0 E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d , A m s t e r d a m . D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . , R o b b e r e c h t , P . , De N e e f , P . , L a b r i e , F . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 5 ) I n v i t r o i n t e r a c t i o n s o f g a s t r o i n t e s t i n a l h o r m o n e s o n c y c l i c a d e n o s i n e 3 ' , 5 ' - m o n o p h o s p h a t e l e v e l s a n d a m y l a s e o u t p u t i n t h e r a t p a n c r e a s . G a s t r o e n t e r o l o g y . 6 6 , 3 1 8 - 3 2 5 . D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . , R o b b e r e c h t , P . , De N e e f , P . , L a m m e n s , M . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 6 ) . I n v i t r o a c t i o n o f b o m b e s i n a n d b o m b e s i n - l i k e p e p t i d e s o n a m y l a s e s e c r e t i o n , c a l c i u m e f f l u x , a n d a d e n y l a t e c y c l a s e a c t i v i t y i n t h e r a t p a n c r e a s . A c o m p a r i s o n w i t h o t h e r s e c r e t a g o g u e s . J . C l i n . I n v e s t . 5 8 - 8 9 1 - 8 9 8 . D i P o l o , R. a n d B e a u g e , L . ( 1 9 7 9 ) P h y s i o l o g i c a l r o l e o f A T P - d r i v e n c a l c i u m pump i n s q u i d a x o n . N a t u r e . 2 7 8 , 2 7 1 - 2 7 3 . D i P o l o , R. a n d B e a u g e , L . ( 1 9 8 0 ) M e c h a n i s m s o f c a l c i u m t r a n s p o r t i n t h e g i a n t a x o n o f t h e s q u i d a n d t h e i r p h y s i o l o g i c a l r o l e . C e l l C a e l u m . 1 , 1 4 7 - 1 6 9 . d i S a n t ' A g n e s e , P . A . a n d D a v i s , P . B . ( 1 9 7 6 ) R e s e a r c h i n c y s t i c f i b r o s i s . N . E n g l . J . M e d . 2 9 5 , 4 8 1 - 4 8 5 , 5 3 4 - 5 4 1 , 5 9 7 - 6 0 2 . D o r m e r , R . L . ( 1 9 8 3 ) D i r e c t d e m o n s t r a t i o n o f i n c r e a s e s i n c y t o s o l i c f r e e C a 2 + d u r i n g s t i m u l a t i o n o f p a n c r e a t i c e n z y m e s e c r e t i o n . B i o s c i e n c e R e p o r t s . 3 , 2 3 3 - 2 4 0 . D o r m e r , R . L . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 8 1 ) S e c r e t a g o g u e - I n d u c e d c h a n g e s i n s u b c e l l u l a r C a 2 + d i s t r i b u t i o n i n i s o l a t e d p a n c r e a t i c a c i n i . Am . J . P h y s i o l . 2 4 0 , G 1 3 0 - G 1 4 0 . D o u g l a s , W.W. ( 1 9 6 8 ) S t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g : t h e c o n c e p t a n d c l u e s f r o m c h r o m a f f i n a n d o t h e r c e l l s . B r i t . J . P h a r m a c o l . 3 4 , 4 5 1 - 4 7 4 . - 163 -D o u g l a s , W.W. a n d N e m e t h , E . F . ( 1 9 8 2 ) On t h e c a l c i u m r e c e p t o r a c t i v a t i n g e x o c y t o s i s : i n h i b i t o r y e f f e c t s o f c a l m o d u l i n - i n t e r a c t i n g d r u g s o n r a t m a s t c e l l s . J . P h y s i o l . 3 2 3 , 2 2 9 - 2 4 4 . D o u g l a s , W.W. a n d P o i s n e r , A . M . ( 1 9 6 4 ) S t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g i n a n e u r o s e c r e t o r y o r g a n : The r o l e o f c a l c i u m i n t h e r e l e a s e o f v a s o p r e s s i n f r o m t h e n e u r o h y p o p h y s i s . J . P h y s i o l . 1 7 2 , 1 - 1 8 . E n y e d i , A . , F a r a g o , A . , S a r k a d i , B . , S z a s z , I . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 8 3 ) C y c l i c A M P - d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a s e s t i m u l a t e s t h e f o r m a t i o n o f p o l y p h o s p h o i n o s i t e s i n t h e p l a s m a m e m b r a n e s o f d i f f e r e n t b l o o d c e l l s . F EBS L e t t . 1 6 1 , 1 5 8 - 1 6 2 . E n y e d i , A . , S a r k a d i , B . , S z a s z , I . , B o t , G . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 8 0 ) M o l e c u l a r p r o p e r t i e s o f r e d c e l l c a l c i u m pump . C e l l C a l c i u m 1 , 2 9 9 - 3 1 0 . E r s p a m e r , V . , F a l c o n i e r i E r s p a m e r , G . , I n s e l v i n i , M . a n d N e g r i , L . ( 1 9 7 2 ) O c c u r r e n c e o f b o m b e s i n a n d a l y t e s i n i n e x t r a c t s o f t h e s k i n o f t h r e e E u r o p e a n d i s c o g l o s s i d f r o g s a n d p h a r m a c o l o g i c a l a c t i o n s o f b o m b e s i n o n e x t r a v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e . B r . J . P h a r m a c o l . 4 5 , 3 3 3 - 3 4 8 . E r s p a m e r , V . a n d M e l c h i o r r i , P . ( 1 9 7 3 ) A c t i v e p o l y p e p t i d e s o f t h e a m p h i b i a n s k i n a n d t h e i r s y n t h e t i c a n a l o g s . P u r e A p p l . C hem . 3 5 , 4 6 3 - 4 9 4 . E r s p a m e r , V . a n d M e l c h i o r r i , P . ( 1 9 7 5 ) A c t i o n s o f b o m b e s i n o n s e c r e t i o n s a n d m o t i l i t y o f t h e g a s t r o i n t e s t i n a l t r a c t . T h o m p s o n , J . C . e d . G a s t r o i n t e s t i n a l h o r m o n e s . A u s t i n : U n i v e r s i t y o f T e x a s P r e s s , 5 7 5 - 5 8 9 . F a m u l s k i , K. a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 8 2 ) C a 2 + t r a n s p o r t i n g a c t i v i t y o f memb rane f r a c t i o n s i s o l a t e d f r o m t h e p o s t - m i t o c h o n d r i a l s u p e r n a t a n t o f r a t l i v e r . C e l l C a l c i u m . 3 , 2 6 3 - 2 8 1 . F e l d h a u s , P . , F r b h l i c h , T . , G o o d y , R . S . , I s a k o v , M . , a n d S c h i r m e r , R . H . ( 1 9 7 5 ) S y n t h e t i c i n h i b i t o r s o f a d e n y l a t e k i n a s e s i n t h e a s s a y s f o r A T P a s e a n d p h o s p h o k i n a s e s . E u r . J . B i o c h e m . 5 7 , 1 9 7 - 2 0 4 . F i s k e , C H . a n d S u b b a r o w , Y . ( 1 9 2 5 ) . T h e c o l o r i m e t r i c d e t e r m i n a t i o n o f p h o s p h o r u s . J . B i o l . Chem . 6 6 , 3 7 5 - 4 0 0 . F o r g e t , G . a n d H e i s l e r , S . ( 1 9 7 6 ) C a l c i u m - a c t i v a t e d A T P a s e a c t i v i t y i n a p l a s m a m e m b r a n e - r i c h p r e p a r a t i o n o f r a t p a n c r e a s . C l i n . E x p . P h a r m a c o l . P h y s i o l . 3 , 6 7 - 7 2 . G a g l i a r d i n o , J . J . , H a r r i s o n , D . E . , C h r i s t i e , M . R . , G a g l i a r d i n o , E . G . a n d A s h c r o f t , S . J . H . ( 1 9 8 0 ) E v i d e n c e f o r t h e p a r t i c i p a t i o n o f c a l m o d u l i n i n s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g i n t h e p a n c r e a t i c ( 3 - c e l l . B i o c h e m . J . 1 9 2 , 9 1 9 - 9 2 7 . - 164 -G a l l a c h e r , D.V. (1982) Are there p u r i n e r g i c receptors on p a r o t i d a c i n a r c e l l s ? Nature. 296, 83-86. Gardner, J.D. (1979) Regulation of pancreatic exocrine f u n c t i o n i n v i t r o . I n i t i a l steps i n the a c t i o n of secretagogues. Annu. Rev. P h y s i o l . 41, 55-66. Gardner, J.D. (1983) Mechanism by which d i b u t y r y l c y c l i c guanosine monophosphate antagonizes the a c t i o n of c h o l e c y s t o k i n i n . Gastroenterology. 84, 1619-1620. Gardner, J.D., Conlon, T.P., Klaeveraan, H.L., Adams, T.D. and O n d e t t i , M.A. (1975) A c t i o n of c h o l e c y s t o k i n i n and c h o l i n e r g i c agents on calcium transport i n I s o l a t e d p a n c r e a t i c acinar c e l l s . 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C a l m o d u l i n a f f i n i t y c h r o m a t o g r a p h y y i e l d s a f u n c t i o n a l p u r i f i e d e r y t h r o c y t e ( C a 2 + + Mg + ) - d e p e n d e n t A T P a s e . B i o c h e m . J . 1 8 9 , 8 1 - 8 8 . G i l l , D . L . , G r o l l m a n , E . F . a n d K o h n , L . ( 1 9 8 1 ) C a l c i u m t r a n s p o r t m e c h a n i s m s i n memb r ane v e s i c l e s f r o m g u i n e a p i g b r a i n s y n a p t o s o m e s . J . B i o l . Chem. 2 5 6 , 1 8 4 - 1 9 2 . G l a z e r , G . a n d S t e e r , M . L . ( 1 9 7 7 ) R e q u i r e m e n t s f o r a c t i v a t i o n o f t r y p s i n o g e n a n d c h y m o t r y p s i n o g e n i n r a b b i t p a n c r e a t i c j u i c e . A n a l . B i o c h e m . 7 7 , 1 3 0 - 1 4 0 . G m a j , P . , M u r e r , H . a n d K i n n e , R. ( 1 9 7 9 ) C a l c i u m i o n t r a n s p o r t a c r o s s p l a s m a m e m b r a n e s i s o l a t e d f r o m r a t k i d n e y c o r t e x . B i o c h e m . J . 1 7 8 , 5 4 9 - 5 5 7 . G o p i n a t h , R . M . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 7 7 ) P h o s p h o d i e s t e r a s e p r o t e i n a c t i v a t o r m i m i c s r e d b l o o d c e l l c y t o p l a s m i c a c t i v a t o r o f ( C a 2 + + Mg + ) - A T P a s e . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 7 7 , 1 2 0 3 - 1 2 0 9 . G r a f , E . a n d P e n n i s t o n , J . T . ( 1 9 8 1 ) C a A T P : T h e s u b s t r a t e , a t l o w ATP c o n c e n t r a t i o n s , o f C a 2 + - A T P a s e f r o m human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s . J . B i o l . Chem . 2 5 6 , 1 5 8 7 - 1 5 9 2 . G r e e n l e e , D . V . , A n d r e a s e n , T . J . a n d S t o r m , D . R . ( 1 9 8 2 ) C a l c i u m - i n d e p e n d e n t s t i m u l a t i o n o f B o r d e t e l l a p e r t u s s i s a d e n y l a t e c y c l a s e b y c a l m o d u l i n . B i o c h e m i s t r y 2 1 , 2 7 5 9 - 2 7 6 4 . G r e g o r y , R . A . , a n d T r a c y , H . J . ( 1 9 6 4 ) T h e c o n s t i t u t i o n a n d p r o p e r t i e s o f two g a s t r i n s e x t r a c t e d f r o m h o g a n t r a l m u c o s a . G u t 5 , 1 0 3 - 1 1 7 . G u n t h e r , G . R . a n d J a m i e s o n , J . D . ( 1 9 7 9 ) I n c r e a s e d i n t r a c e l l u l a r c y c l i c GMP d o e s n o t c o r r e l a t e w i t h p r o t e i n d i s c h a r g e f r o m p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . N a t u r e . 2 8 0 , 3 1 8 - 3 2 0 . H a d o r n , B . , J o h a n s e n , P . G . a n d A n d e r s o n , C M . ( 1 9 6 8 ) P a n c r e o z y m i n s e c r e t i n t e s t o f e x o c r i n e p a n c r e a t i c f u n c t i o n i n c y s t i c f i b r o s i s a n d t h e s i g n i f i c a n c e o f t h e r e s u l t f o r t h e p a t h o g e n e s i s o f t h e d i s e a s e . C a n . M e d . A s s n . J . 9 8 , 3 7 7 - 3 8 5 . H a h n e , W . F . , J e n s e n , R . T . , L e m p , G . F . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 8 1 ) P r o g l u m i d e a n d b e n z o t r i p t : M e m b e r s o f a d i f f e r e n t c l a s s o f c h o l e c y s t o k i n i n r e c e p t o r a n t a g o n i s t s . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U S A , 7 8 , 6 3 0 4 - 6 3 0 8 . H a m l y n , J . M . a n d S e n i o r , A . E . ( 1 9 8 3 ) E v i d e n c e t h a t M g 2 + + Ca - a c t i v a t e d a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e i n r a t p a n c r e a s i s a p l a s m a - m e m b r a n e e c t o - e n z y m e . B i o c h e m . . J . 2 1 4 , 5 9 - 6 8 . - 166 -H a u s e r , H . a n d D a w s o n , R . M . C . ( 1 9 6 7 ) T h e b i n d i n g o f c a l c i u m a t l i p i d - w a t e r i n t e r f a c e s . E u r . J . B i o c h e m . 1, 6 1 - 6 9 . H a y m o v i t z , A . a n d S c h e e l e , G . A . ( 1 9 7 6 ) C e l l u l a r c y c l i c n u c l e o t i d e s a n d e n z y m e s e c r e t i o n i n t h e p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U S A , 7 3 , 1 5 6 - 1 6 0 . H e i s l e r , S . , C h a u v e l o t , L . , D e s j a r d i n s , D . , N o e l , C , L a m b e r t , H . a n d D e s y - A u d e t , L . ( 1 9 8 1 ) S t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g i n e x o c r i n e p a n c r e a s : p o s s i b l e r o l e o f c a l m o d u l i n . C a n . J . P h y s i o l . P h a r m a c o l . 5 9 , 9 9 4 - 1 0 0 1 . H e i s l e r , S . , F a s t , D. a n d T e n e n h o u s e , A . ( 1 9 7 2 ) R o l e o f C a 2 + a n d c y c l i c AMP i n p r o t e i n s e c r e t i o n f r o m r a t e x o c r i n e p a n c r e a s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 2 7 9 , 5 6 1 - 5 7 2 . H e i s l e r , S . a n d G r o n d i n , G . ( 1 9 7 3 ) . E f f e c t o f l a n t h a n u m o n ' + 5 C a f l u x a n d s e c r e t i o n o f p r o t e i n f r o m r a t e x o c r i n e p a n c r e a s . L i f e S c i . 1 3 , 7 8 3 - 7 9 4 . H e i s l e r , H . a n d G r o n d i n , G . ( 1 9 7 5 ) A b s e n c e o f e f f e c t s o f d i b u t y r y l c y c l i c g u a n o s i n e 3 ' , 5 ' - m o n o p h o s p h a t e o n r e l e a s e o f a - a m y l a s e , C a e f f l u x , a n d p r o t e i n s y n t h e s i s i n r a t p a n c r e a s in v i t r o . E x p e r i e n t i a . 3 1 , 9 3 6 - 9 3 8 . H i d a k a , H . a n d T a n a k a , T . ( 1 9 8 2 ) B i o p h a r m a c o l o g i c a l a s s e s s m e n t o f c a l m o d u l i n f u n c t i o n : u t i l i t y o f c a l m o d u l i n a n t a g o n i s t s I n : C a l m o d u l i n a n d C a l c i u m R e c e p t o r s . K a k i u c h i , S . , H i d a k a , H . a n d M e a n s , A . R . e d s . p p . 1 9 - 3 3 . N . Y . P l e n u m P r e s s . H i n d s , T . R . , L a r s e n , F . L . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 7 8 ) P l a s m a memb rane c a l c i u m t r a n s p o r t : s t i m u l a t i o n b y s o l u b l e p r o t e i n s . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 8 1 , 4 5 5 - 4 6 1 . H o k i n , L . E . ( 1 9 6 6 ) E f f e c t s o f c a l c i u m o m i s s i o n o n a c e t y l c h o l i n e s t i m u l a t e d a m y l a s e s e c r e t i o n a n d p h o s p h o l i p i d s y n t h e s i s i n p i g e o n p a n c r e a s s l i c e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a , 1 1 5 , 2 1 9 - 2 2 1 . H o k i n , L . E . , a n d H o k i n , M . R . ( 1 9 5 5 ) E f f e c t s o f a c e t y l c h o l i n e o n t h e t u r n o v e r o f p h o s p h o r y l u n i t s i n i n d i v i d u a l p h o s p h o l i p i d s o f p a n c r e a s s l i c e s a n d b r a i n c o r t e x s l i c e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a , 1 8 , 1 0 2 - 1 1 0 . H o k i n , L . E . a n d H o k i n , M . R . ( 1 9 5 6 ) T h e a c t i o n s o f p a n c r e o z y m i n i n p a n c r e a s s l i c e s a n d t h e r o l e o f p h o s p h o l i p i d s i n e n z y m e s e c r e t i o n . J . P h y s i o l . 1 3 2 , 4 4 2 - 4 5 3 . H o r t o n , C . R . , C o l e , W . Q . a n d B a d e r , H . ( 1 9 7 0 ) D e p r e s s e d ( C a ) - t r a n s p o r t A T P a s e i n c y s t i c f i b r o s i s e r y t h r o c y t e s . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 4 0 , 5 0 5 - 5 0 9 . - 167 -H u x l e y , H . E . ( 1 9 7 3 ) M u s c u l a r c o n t r a c t i o n a n d c e l l m o t i l i t y . N a t u r e . 2 4 3 , 4 4 5 - 4 4 9 . I l u n d a i n , A . a n d N a f t a l i n , R . J . ( 1 9 7 9 ) R o l e o f C a 2 + - d e p e n d e n t r e g u l a t o r p r o t e i n i n i n t e s t i n a l s e c r e t i o n . N a t u r e . 2 7 9 4 4 6 - 4 4 8 . I w a t s u k i , N . a n d P e t e r s e n , O . H . ( 1 9 7 8 ) . I n v i t r o a c t i o n o f b o m b e s i n o n a m y l a s e s e c r e t i o n , memb rane p o t e n t i a l a n d memb rane r e s i s t a n c e i n r a t a n d mou se p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . A c o m p a r i s o n w i t h o t h e r s e c r e t a g o g u e s . J . C l i n . I n v e s t . 6 1 , 4 1 - 4 6 . J a m i e s o n , J . D . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 6 a ) I n t r a c e l l u l a r t r a n s p o r t o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n t h e p a n c r e a t i c e x o c r i n e c e l l s . I : R o l e o f t h e p e r i p h e r a l e l e m e n t s o f t h e G o l g i c o m p l e x . J . C e l l B i o l . 3 4 , 5 7 7 - 5 9 6 . J a m i e s o n , J . D . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 6 b ) I n t r a c e l l u l a r t r a n s p o r t o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n t h e p a n c r e a t i c e x o c r i n e c e l l s . I I : T r a n s p o r t t o c o n d e n s i n g v a c u o l e s a n d z y m o g e n g r a n u l e s . J . C e l l B i o l . 3 4 , 5 9 7 - 6 1 5 . J a m i e s o n , J . D . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 1 a ) C o n d e n s i n g v a c u o l e c o n v e r s i o n a n d z y m o g e n g r a n u l e d i s c h a r g e i n p a n c r e a t i c e x o c r i n e c e l l s : m e t a b o l i c s t u d i e s . J . C e l l B i o l . 4 8 , 5 0 3 - 5 2 2 . J a m i e s o n , J . D . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 1 b ) S y n t h e s i s , i n t r a c e l l u l a r t r a n s p o r t a n d d i s c h a r g e o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n s t i m u l a t e d p a n c r e a t i c e x o c r i n e c e l l s . J . C e l l B i o l . 5 0 , 1 3 5 - 1 5 8 . J a m i e s o n , J . D . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 7 ) P r o d u c t i o n o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n a n i m a l c e l l s . I n : I n t e r n a t i o n a l C e l l B i o l o g y . E d s B . R . B r i n k l e y a n d K . R . P o r t e r . New Y o r k : R o c k e f e l l e r U n i v . P r e s s , p p . 3 0 8 - 3 1 7 . J a r r e t t , H .W. a n d P e n n i s t o n , J . T . ( 1 9 7 7 ) P a r t i a l p u r i f i c a t i o n o f t h e ( C a 2 ^ " + M g 2 + ) - A T P a s e a c t i v a t o r f r o m human e r y t h r o c y t e s : I t s s i m i l a r i t y t o t h e a c t i v a t o r o f 3 ' : 5 ' - c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 7 7 , 1 2 1 0 - 1 2 1 6 . J a r r e t t , H .W. a n d P e n n i s t o n , J . T . ( 1 9 7 8 ) P u r i f i c a t i o n o f t h e C a + - s t i m u l a t e d A T P a s e a c t i v a t o r f r o m human e r y t h r o c y t e s . I t s m e m b e r s h i p i n t h e c l a s s o f C a 2 + - b i n d i n g m o d u l a t o r p r o t e i n s . J . B i o l . C h e m . 2 5 3 , 4 6 7 6 - 4 6 8 2 . J e f f e r y , D . A . , R o u f o g a l i s , B . D . a n d K a t z , S . ( 1 9 8 1 ) T h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n o n t h e p h o s p h o p r o t e i n i n t e r m e d i a t e o f M g 2 + d e p e n d e n t Ca + s t i m u l a t e d a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e i n human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s . B i o c h e m . J . 1 9 8 , 4 8 1 - 4 8 6 . J e n s e n , R . T . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 8 1 ) I d e n t i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f r e c e p t o r s f o r s e c r e t a g o g u e s on p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . F e d e r a t i o n P r o c . 4 0 , 2 4 8 6 - 2 4 9 6 . - 168 -J e n s e n , R . T . , Le rap , G . F . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 8 0 ) I n t e r a c t i o n o f c h o l e c y s t o k i n i n w i t h s p e c i f i c memb r ane r e c e p t o r s o n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U . S . A . 7 7 , 2 0 7 9 - 2 0 8 3 . J e n s e n , R . T . , M o o d y , T . , P e r t , C . , R i v i e r , J . E . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 8 ) I n t e r a c t i o n o f b o m b e s i n a n d l i t o r i n w i t h s p e c i f i c m e m b r a n e r e c e p t o r s o n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U . S . A . 7 5 , 6 1 3 9 - 6 1 4 3 . J o h a n s e n , P . G . , A n d e r s o n , C . M . a n d H a d o r n , B . ( 1 9 6 8 ) C y s t i c f i b r o s i s o f t h e p a n c r e a s : A g e n e r a l i z e d d i s t u r b a n c e o f w a t e r a n d e l e c t r o l y t e movemen t i n e x o c r i n e t i s s u e s . L a n c e t 1 , 4 5 5 - 4 6 0 . J o n e s , H . P . , B r a d f o r d , M . M . , M c R o r i e , R . A . a n d C o r n m i e r , M . J . ( 1 9 7 8 ) H i g h l e v e l s o f c a l c i u m d e p e n d e n t m o d u l a t o r p r o t e i n i n s p e r m a t o z o a a n d i t s s i m i l a r i t y t o b r a i n m o d u l a t o r p r o t e i n . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 8 2 , 1 2 6 4 - 1 2 7 2 . J o n e s , L . M . a n d M i c h e l l , R . H . ( 1 9 7 5 ) T h e r e l a t i o n s h i p o f c a l c i u m t o r e c e p t o r - c o n t r o l l e d s t i m u l a t i o n o f p h o s p h a t i d y l i n o s i t o l t u r n o v e r . B i o c h e m . J . 1 4 8 , 4 7 9 - 4 8 5 . K a n n o , T . ( 1 9 7 2 ) C a l c i u m - d e p e n d e n t a m y l a s e r e l e a s e a n d e l e c t r o p h y s i o l o g i c a l m e a s u r e m e n t s i n c e l l s o f t h e p a n c r e a s . J . P h y s i o l . 2 2 6 , 3 5 3 - 3 7 1 . K a n n o , T . a n d S a i t o , A . ( 1 9 7 6 ) The p o t e n t i a t i n g i n f l u e n c e s o f i n s u l i n o n p a n c r e o z y m i n - i n d u c e d h y p e r p o l a r i z a t i o n a n d a m y l a s e r e l e a s e i n t h e p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l . J . P h y s i o l . 1 8 9 , 5 3 5 - 5 4 4 . K a s a i , K. a n d F i e l d , J . B . ( 1 9 8 2 ) C a 2 + - s t i m u l a t e d , M g 2 + - d e p e n d e n t A T P a s e i n b o v i n e t h y r o i d p l a s m a m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 6 8 5 , 2 2 5 - 2 2 9 . K a t z , B . a n d M i l e d i , R. ( 1 9 6 7 ) T h e t i m i n g o f c a l c i u m a c t i o n d u r i n g n e u r o m u s c u l a r t r a n s m i s s i o n . J . P h y s i o l . 1 8 9 , 5 3 5 - 5 4 4 . K a t z , S . a n d B l o s t e i n , R . ( 1 9 7 5 ) C a - s t i m u l a t e d m e m b r a n e p h o s p h o r y l a t i o n a n d A T P a s e a c t i v i t y o f t h e human e r y t h r o c y t e . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 3 8 9 , 3 1 4 - 3 2 4 . K a t z , S . a n d R e r a t u l l a , M . A . ( 1 9 7 8 ) P h o s p h o d i e s t e r a s e p r o t e i n a c t i v a t o r s t i m u l a t e s c a l c i u m t r a n s p o r t i n c a r d i a c m i c r o s o m a l p r e p a r a t i o n s e n r i c h e d i n s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m . B i o c h i m . B i o p h y s . R e s . Commun . 8 3 , 1 3 7 3 - 1 3 7 9 . K a t z , S . , R o u f o g a l i s , B . D . , L a n d m a n , A . D . a n d H o , L . ( 1 9 7 9 ) P r o p e r t i e s o f ( C a 2 + + M g 2 + ) - A T P a s e o f e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s p r e p a r e d b y d i f f e r e n t p r o c e d u r e s : i n f l u e n c e o f M g 2 + , C a 2 + , ATP a n d p r o t e i n a c t i v a t o r . J . S u p r a m o l . S t r u c t . 1 0 , 2 1 5 - 2 2 5 . - 169 -K e m p e n , H . J . M . , De P o n t , J . J . H . H . M . a n d B o n t i n g , S . L . ( 1 9 7 7 ) R a t p a n c r e a t i c a d e n y l a t e c y c l a s e . V : I t s p r e s e n c e i n i s o l a t e d r a t p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 4 9 6 , 5 2 1 - 5 3 1 . K h a n d e l w a l , R . K . , K o t e l l o , M . C . a n d W a n g , J . H . ( 1 9 8 0 ) T h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n a n d T r o p o n i n - C on a c t i v i t i e s o f h o m o g e n o u s l i v e r p h o s p h o p r o t e i n p h o s p h a t a s e s . A r c h . B i o c h e m . B i o p h y s . 2 0 3 , 2 4 4 - 2 5 0 . K i l h o f f e r , M . C , C o o k , G . H . a n d W o l f f , J . ( 1 9 8 3 ) C a l c i u m - i n d e p e n d e n t a c t i v a t i o n o f a d e n y l a t e c y l a s e b y c a l m o d u l i n . E u r . J . B i o c h e m . 1 3 3 , 1 1 - 1 5 . K i m m e l , J . R . , H a y d e n , L . J . a n d P o l l a c k , H . G . ( 1 9 7 5 ) I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f a new p a n c r e a t i c p o l y p e p t i d e h o r m o n e . J . B i o l . C h e m . 2 5 0 , 9369 - 9376 . K i r c h b e r g e r , M . A . a n d A n t o n e t z , T . ( 1 9 8 2 ) C a l m o d u l i n - m e d i a t e d r e g u l a t i o n o f c a l c i u m t r a n s p o r t a n d ( C a 2 + + M g 2 + ) - a c t i v a t e d A T P a s e a c t i v i t y i n i s o l a t e d c a r d i a c s a r c o p l a s m i c r e t i c u l u m . J . B i o l . C hem . 2 5 7 , 5 6 8 5 - 5 6 9 1 . K l e e , C . B . , C r o u c h , T . H . a n d K r i n k s , M . H . ( 1 9 7 9 ) C a l c i n e u r i n : A c a l c i u m a n d c a l m o d u l i n b i n d i n g p r o t e i n o f t h e n e r v o u s s y s t e m . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . U . S . A . 7 6 , 6 2 7 0 - 6 2 7 3 . K l e e , C . B . , C r o u c h , T . H . a n d R i c h m a n , P . G . ( 1 9 8 0 ) C a l m o d u l i n . A n n . R e v . B i o c h e m . 4 9 , 4 8 9 - 5 1 5 . K n a u f , P . A . , P r o v e r b i o , F . a n d H o f f m a n , J . F . ( 1 9 7 4 ) E l e c t r o p h o r e t i c s e p a r a t i o n o f d i f f e r e n t p h o s p h o p r o t e i n s a s s o c i a t e d w i t h C a - A T P a s e a n d N a , K - A T P a s e i n human r e d c e l l g h o s t s . J . G e n . P h y s i o l . 6 3 , 3 2 4 - 3 3 6 . K n o w l e s , A . F . , I s l e r , R . E . a n d R e e c e , J . F . ( 1 9 8 3 ) T h e common o c c u r r e n c e o f ATP d i p h o s p h o h y d r o l a s e i n m a m m a l i a n p l a s m a m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 7 3 1 - , 8 8 - 9 6 . K o n d o , S . a n d S c h u l z , I . ( 1 9 7 6 a ) C a l c i u m i o n u p t a k e i n i s o l a t e d p a n c r e a s c e l l s i n d u c e d b y s e c r e t a g o g u e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 4 1 9 , 7 6 - 9 2 . K o n d o , S . a n d S c h u l z , I . ( 1 9 7 6 b ) C a 2 + f l u x e s i n i s o l a t e d c e l l s o f r a t p a n c r e a s . E f f e c t o f s e c r e t a g o g u e s a n d d i f f e r e n t C a + c o n c e n t r a t i o n s . J . M e m b r a n e B i o l . 2 9 , 1 8 5 - 2 0 3 . K o n t u r e k , S . J . , K r o l , R. a n d T a s l e r , J . ( 1 9 7 6 ) E f f e c t o f b o m b e s i n a n d r e l a t e d p e p t i d e s o n t h e r e l e a s e a n d a c t i o n o f i n t e s t i n a l h o r m o n e s o n p a n c r e a t i c s e c r e t i o n . J . P h y s i o l . 2 5 7 , 6 6 3 - 6 7 2 . K o r c , M . , S a n k a r a n , H . , W o n g , K . Y . , W i l l i a m s , J . A . a n d G o l d f i n e , L . D . ( 1 9 7 8 ) I n s u l i n r e c e p t o r s i n i s o l a t e d mouse p a n c r e a t i c a c i n i . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 8 4 , 2 9 3 - 2 9 9 . - 170 -R o m b e r g , A . ( 1 9 5 5 ) L a c t i c d e h y d r o g e n a s e o f m u s c l e . M e t h o d s E n z y m o l . 1 , 4 4 1 - 4 4 3 . K o t a g a l , N . , C o l c a , J . R . a n d M c D a n i e l , M . L . ( 1 9 8 3 ) A c t i v a t i o n o f a n i s l e t c e l l p l a s m a membrane ( C a 2 + + Mg + ) - A T P a s e b y c a l m o d u l i n a n d C a - E G T A . J . B i o l . C hem . 2 5 8 , 4 8 0 8 - 4 8 1 3 . K o t a g a l , N . , P a t k e , C , L a n d t , M . , M c D o n a l d , J . , C o l c a , J . , L a c y , P . a n d M c D a n i e l , M , ( 1 9 8 2 ) R e g u l a t i o n o f p a n c r e a t i c i s l e t - c e l l p l a s m a memb rane Ca + + Mg - A T P a s e by c a l m o d u l i n . FEBS L e t t . 1 3 7 , 2 4 9 - 2 5 2 . K r a e h e n b u h l , J . P . , R a c i n e , L . a n d J a m i e s o n , J . D . ( 1 9 7 7 ) I m m u n o c y t o c h e m i c a l l o c a l i z a t i o n o f s e c r e t o r y p r o t e i n s i n b o v i n e p a n c r e a t i c e x o c r i n e c e l l s . J . C e l l B i o l . 7 2 , 4 0 6 - 4 2 3 . K r e t s i n g e r , R . ( 1 9 7 6 ) C a l c i u m - b i n d i n g p r o t e i n . A n n . R e v . B i o c h e m . 4 5 , 2 3 9 - 2 6 6 . K r i b b e n , A . , T y r a k o w s k ^ , T . a n d S c h u l z , I . ( 1 9 8 3 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f M g - A T P d e p e n d e n t Ca t r a n s p o r t i n c a t p a n c r e a t i c m i c r o s o m e s . Am. J . P h y s i o l . 2 4 4 , G 4 8 0 - G 4 9 0 . K w a n , C . Y . ( 1 9 8 2 ) M g 2 + - o r C a 2 + - A c t i v a t e d A T P a s e a c t i v i t i e s o f p l a s m a m e m b r a n e s i s o l a t e d f r o m v a s c u l a r s m o o t h m u s c l e . E n z y m e s , 2 8 , 3 1 7 - 3 2 7 . L a e m m l i , V . K . a n d F a v r e , M . ( 1 9 7 3 ) M a t u r a t i o n o f h e a d o f b a c t e r i o p h a g e T 4 : 1 . DNA p a c k a g i n g e v e n t s . J . M o l e c . B i o l . 8 0 , 5 7 5 - 5 9 9 . L a m b e r t , M . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 8 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f ( M g , C a ) - A T P a s e a c t i v i t y i n r a t p a n c r e a t i c p l a s m a m e m b r a n e s . E u r . J . B i o c h e m . 9 1 , 4 8 5 - 4 9 2 . L a r o s e , L . , D u m o n t , Y . , A s s e l i n , J . , M o r r i s s e t , J . a n d P o i r i e r , G . G . ( 1 9 8 1 ) M u s c a r i n i c r e c e p t o r o f r a t p a n c r e a t i c a c i n i : [ H]QNB b i n d i n g a n d a m y l a s e s e c r e t i o n . E u r . J . P h a r m a c o l . 7 6 , 2 4 7 - 2 5 4 . L a r o s e , L . , L a n o e , J . , M o r r i s s e t , J . , G e o f f r i o n , L . , D u m o n t , Y . , L o r d , A . a n d P o i r i e r , G . G . ( 1 9 7 9 ) R a t p a n c r e a t i c m u s c a r i n i c c h o l i n e r g i c r e c e p t o r s . R o s s e l i n , G . , F r o m a g e o t , P . , B o n f i l s , S . e d s . H o r m o n e r e c e p t o r s i n d i g e s t i o n a n d n u t r i t i o n . A m s t e r d a m : E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d , p p . 2 2 9 - 2 3 8 . L a r s e n , F . ^ . , H i n d s , T . R . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 7 8 a ) On t h e r e d b l o o d c e l l C a + - p u m p : a n e s t i m a t e o f s t o i c h i o m e t r y . J . M e m b r a n e B i o l . 4 1 , 3 6 1 - 3 7 6 . L a r s e n , F . L . , K a t z , S . a n d R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 1 ) C a l m o d u l i n r e g u l a t i o n o f C a - t r a n s p o r t i n human e r y t h r o c y t e s . B i o c h e m . J . 2 0 0 , 1 8 5 - 1 9 1 . - 171 -L a r s e n , F . L . , R a e s s , B . O . , H i n d s , T . R . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 7 8 b ) M o d u l a t o r b i n d i n g p r o t e i n a n t a g o n i z e s a c t i v a t i o n o f ( C a 2 + + M g 2 + ) - A T P a s e a n d C a 2 + - t r a n s p o r t o f r e d b l o o d c e l l m e m b r a n e s . J . S u p r a m o l . S t r u c t . 9 , 2 6 9 - 2 7 4 . L a r s e n , F . L . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 7 9 ) C a l c i u m t r a n s p o r t a c r o s s t h e p l a s m a m e m b r a n e : S t i m u l a t i o n b y c a l m o d u l i n . S c i e n c e . 2 0 4 , 3 0 6 - 3 0 9 . L e B e l , D . , P o i r i e r , G . G . , P h a n e u f , S . , S t - J e a n , P . , L a l i b e r t e , J . F . a n d B e a u d o i n , A . R . ( 1 9 8 0 ) C h a r a c t e r i z a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f a c a l c i u m - s e n s i t i v e ATP d i p h o s p h o h y d r o l a s e f r o m p i g p a n c r e a s . J . B i o l . C hem . 2 5 5 , 1 2 2 7 - 1 2 3 3 . L e v i n , R . M . , a n d W e i s s , B . ( 1 9 7 6 ) M e c h a n i s m b y w h i c h p s y c h o t r o p i c d r u g s i n h i b i t a d e n o s i n e c y c l i c 3 1 , 5 ' - m o n o p h o s p h a t e p h o s p h o d i e s t e r a s e o f b r a i n . M o l . P h a r m a c o l . 1 2 , 5 8 1 - 5 8 9 . L e v i n , R . M . a n d W e i s s , B . ( 1 9 7 7 ) B i n d i n g o f t r i f l u o p e r a z i n e t o t h e c a l c i u m - d e p e n d e n t a c t i v a t o r o f c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . M o l . P h a r m a c o l . 1 3 , 6 9 0 - 6 9 7 . L e v i n , R . M . a n d W e i s s , B . ( 1 9 7 8 ) S p e c i f i c i t y o f t h e b i n d i n g o f t r i f l u o p e r a z i n e t o t h e c a l c i u m - d e p e n d e n t a c t i v a t o r o f p h o s p h o d i e s t e r a s e a n d t o a s e r i e s o f o t h e r c a l c i u m - b i n d i n g p r o t e i n s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 5 4 0 , 1 9 7 - 2 0 4 . L e v i n , R . M . a n d W e i s s , B . ( 1 9 7 9 ) S e l e c t i v e b i n d i n g o f a n t i p s y c h o t i c s a n d o t h e r p s y c h o a c t i v e a g e n t s t o t h e c a l c i u m - d e p e n d e n t a c t i v a t o r o f c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e . J . P h a r m a c o l . E x p . T h e r a p . 2 0 8 , 4 5 4 - 4 5 9 . L e w , P . D . a n d S t o s s e l , T . P . ( 1 9 8 0 ) C a l c i u m t r a n s p o r t by m a c r o p h a g e p l a s m a m e m b r a n e s . J . B i o l . C h e m . 2 5 5 , 5 8 4 1 - 5 8 4 6 . L i c h t m a n , A . H . , S e g e l , G . B . a n d L i c h t m a n , M . A . ( 1 9 8 1 ) C a l c i u m t r a n s p o r t a n d c a l c i u m - A T P a s e a c t i v i t y i n human l y m p h o c y t e p l a s m a memb rane v e s i c l e s . J . B i o l . C h e m . 2 5 6 , 6 1 4 8 - 6 1 5 4 . L i c h t n e r , R . , a n d W o l f , H . U . ( 1 9 7 9 ) D o d e c y l s u l p h a t e / p o l y a c r y l a m i d e - g e l e l e c t r o p h o r e s i s a t l o w pH v a l u e s a n d l o w t e m p e r a t u r e s . B i o c h e m . J . 1 8 1 , 7 5 9 - 7 6 1 . L o n g , B .W . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 7 ) E f f e c t s o f c h o l e c y s t o k i n i n o n a d e n y l a t e c y c l a s e a c t i v i t y i n d i s p e r s e d p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . G a s t r o e n t e r o l o g y . 7 3 , 1 0 0 8 - 1 0 1 4 . L o t e r s z t a j n , S . , H a n o u n e , J . a n d P e c k e r , F . ( 1 9 8 1 ) A h i g h a f f i n i t y c a l c i u m - s t i m u l a t e d m a g n e s i u m - d e p e n d e n t A T P a s e i n r a t l i v e r p l a s m a m e m b r a n e s . D e p e n d e n c e o n a n e n d o g e n o u s p r o t e i n a c t i v a t o r d i s t i n c t f r o m c a l m o d u l i n . J . B i o l . C hem . 2 5 6 , 1 1 2 0 9 - 1 1 2 1 5 . L o w r y , O . H . , R o s e b r o u g h , N . J . , F a r r , A . L . , a n d R a n d a l l , R . J . ( 1 9 5 1 ) P r o t e i n m e a s u r e m e n t w i t h t h e f o l i n p h e n o l r e a g e n t . J . B i o l . C h e m . 1 9 3 , 2 6 5 - 2 7 5 . - 172 -L u c a s , M . , G a l v a n , A . , S o l a n o , P . a n d G o b e r n a , R . ( 1 9 8 3 ) C o m p a r t m e n t a t l o n o f c a l c i u m i n d i g i t o n i n - d i s r u p t e d g u i n e a p i g p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 7 3 1 , 1 2 9 - 1 3 6 . L u c a s , M . , S c h m i d , G . , K r o m a s , R. a n d L o f f l e r , G . ( 1 9 7 8 ) C a l c i u m m e t a b o l i s m a n d e n z y m e s e c r e t i o n i n g u i n e a p i g p a n c r e a s . U p t a k e , s t o r a g e a n d r e l e a s e o f c a l c i u m i n w h o l e c e l l s a n d m i t o c h o n d r i a l a n d m i c r o s o m a l f r a c t i o n s . E u r . J . B i o c h e m . 8 5 , 6 0 9 - 6 1 9 . L u t h r a , M . G . , A u , K . S . a n d H a n n a h a n , D . J . ( 1 9 7 7 ) P u r i f i c a t i o n o f a c t i v a t o r o f human e r y t h r o c y t e memb rane ( C a 2 + + Mg + ) - A T P a s e . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 7 7 , 6 7 8 - 6 8 7 . M a c l n t y r e , J . a n d G r e e n , J . W . ( 1 9 7 8 ) S t i m u l a t i o n o f Ca - t r a n s p o r t i n i n s i d e - o u t v e s i c l e s o f human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s b y a s o l u b l e c y t o p l a s m i c a c t i v a t o r . B i o c h i m . B i o p h y s . a c t a . 5 1 0 , 3 7 3 - 3 7 7 . M a c M a n u s , J . P . ( 1 9 8 1 ) T h e s t i m u l a t i o n o f c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e b y a Mj. 1 1 5 0 0 c a l c i u m b i n d i n g p r o t e i n f r o m h e p a t o m a . F E B S L e t t . 1 2 6 , 2 4 5 - 2 4 9 . M a l o u f , N . N . , M e i s s n e r , G . ( 1 9 7 9 ) L o c a l i z a t i o n o f a M g 2 + o r C a 2 + a c t i v a t e d ( b a s i c ) A T P a s e i n s k e l e t a l m u s c l e . E x p l . C e l l R e s . 1 2 2 , 2 3 3 - 2 5 0 . M a n g o s , J . A . a n d D o n n e l l y , W . H . ( 1 9 8 1 ) I s o l a t e d p a r o t i d a c i n a r c e l l s f r o m p a t i e n t s w i t h c y s t i c f i b r o s i s . M o r p h o l o g y a n d c o m p o s i t i o n . J . D e n t . R e s . 6 0 , 1 9 - 2 5 . M a r t i n , S . S . a n d S e n i o r , A . E . ( 1 9 8 0 ) M e m b r a n e a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e a c t i v i t i e s i n r a t p a n c r e a s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 6 0 2 , 4 0 1 - 4 1 8 . M a r u y a m a , Y . a n d P e t e r s e n , O . H . ( 1 9 8 2 ) S i n g l e - c h a n n e l c u r r e n t s i n i s o l a t e d p a t c h e s o f p l a s m a memb rane f r o m b a s a l s u r f a c e o f p a n c r e a t i c a c i n i . N a t u r e . 2 9 9 , 1 5 9 - 1 6 1 . M a t t h e w s , E . K . , P e t e r s e n , O . H . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 7 3 ) P a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s : A c e t y l c h o l l n e - i n d u c e d memb rane d e p o l a r i z a t i o n , c a l c i u m e f f l u x a n d a m y l a s e r e l e a s e . J . P h y s i o l . 2 3 4 , 6 8 9 - 7 0 1 . M a y , R . J . , C o n l o n , T . P . , E r s p a m e r , V . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 8 ) A c t i o n s o f p e p t i d e s i s o l a t e d f r o m a m p h i b i a n s k i n o n p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . Am . J . P h y s i o l . 2 3 5 , E 1 1 2 - E 1 1 8 . M c D o n a l d , J . M . , C h a n , K - M , G o e w e r t , R . R . , M o o n e y , R . A . a n d P e r s h a d s i n g h , H . A . ( 1 9 8 2 ) T h e ( C a 2 + + M g 2 + ) - A T P a s e o f a d i p o c y t e p l a s m a m e m b r a n e : r e g u l a t i o n b y c a l m o d u l i n a n d i n s u l i n . A n n . N . Y . A c a d . S c i . 4 0 2 , 3 8 1 - 4 0 1 . - 173 -M e r r i t t , J . E . , W a l k e r , S . W . , W o j c i k i e w i c z , R . J . H . , M a c N e i l , S . , B r o w n , B . L . a n d T o m l i n s o n , S . ( 1 9 8 2 ) The r o l e o f c a l m o d u l i n i n s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g i n t h e a n t e r i o r p i t u i t a r y . B i o c h e m . S o c . T r a n s . 1 0 , 3 9 7 . M l c h e l l , R . H . ( 1 9 7 5 ) I n o s i t o l p h o s p h o l i p i d s a n d c e l l s u r f a c e r e c e p t o r f u n c t i o n . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 4 1 5 , 8 1 - 1 4 7 . M i l l e r , L . J . , R e i l l y , W . M . , R o s e n z w e i g , S . A . , J a m i e s o n , J . D . a n d G o , V . L . W . ( 1 9 8 3 ) A s o l u b l e i n t e r a c t i o n b e t w e e n d i b u t y r y l c y c l i c g u a n o s i n e 3 ' : 5 ' - m o n o p h o s p h a t e a n d c h o l e c y s t o k i n i n : A p o s s i b l e m e c h a n i s m f o r t h e i n h i b i t i o n o f c h o l e c y s t o k i n i n a c t i v i t y . G a s t r o e n t e r o l o g y . 8 4 , 1 5 0 5 - 1 5 1 1 . M i l u t i n o v i c , S . , S a c h s , G . , H a a s e , W. a n d S c h u l z , I . ( 1 9 7 7 ) S t u d i e s o n i s o l a t e d s u b c e l l u l a r c o m p o n e n t s o f c a t p a n c r e a s . J . M e m b r a n e B i o l . 3 6 , 2 5 3 - 2 7 9 . M i l u t i n o v i c , S . , S c h u l z , I a n d R o s s e l i n , G . ( 1 9 7 6 ) T h e i n t e r a c t i o n s o f s e c r e t i n w i t h p a n c r e a t i c m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 4 3 6 , 1 1 3 - 1 2 7 . M u a l l e m , S . a n d K a r l i s h , S . ( 1 9 8 0 ) R e g u l a t o r y i n t e r a c t i o n b e t w e e n c a l m o d u l i n a n d '-ATP on t h e r e d c e l l c a l c i u m pump . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 5 9 7 , 6 3 1 - 6 3 6 . M u a l l e m , S . a n d K a r l i s h , S . ( 1 9 8 1 ) S t u d i e s o n t h e m e c h a n i s m o f r e g u l a t i o n o f t h e r e d - c e l l Ca pump b y C a l m o d u l i n a n d A T P . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 6 4 7 , 7 3 - 8 6 . M u l l i n s , L . J . ( 1 9 7 9 ) T h e g e n e r a t i o n o f e l e c t r i c c u r r e n t s i n C a r d i a c f i b e r s b y N a / C a e x c h a n g e . Am . J . P h y s i o l . 2 3 6 , C 1 0 3 - C 1 1 0 . M u r e r , H a n d H i l d m a n n , B . ( 1 9 8 1 ) T r a n s c e l l u l a r t r a n s p o r t o f c a l c i u m a n d i n o r g a n i c p h o s p h a t e i n t h e s m a l l i n t e s t i n a l e p i t h e l i u m . Am. J . P h y s i o l . 2 4 0 , G 4 0 9 - G 4 1 6 . M u t t , V . a n d J o r p e s , J . E . ( 1 9 6 8 ) S t r u c t u r e o f p o r c i n e c h o l e c y s t o k i n i n - p a n c r e o z y m i n I . C l e a v a g e w i t h t h r o m b i n a n d t r y p s i n . E u r . J . B i o c h e m . 6 , 1 5 6 - 1 6 2 . N g , K . H . , M o r r i s s e t , J . a n d P o i r i e r , G . G . ( 1 9 7 9 ) M u s c a r i n i c r e c e p t o r s o f t h e p a n c r e a s : a c o r r e l a t i o n b e t w e e n d i s p l a c e m e n t o f [ H ] - q u i n u c l i d i n y l b e n z i l a t e b i n d i n g a n d a m y l a s e s e c r e t i o n . P h a r m a c o l o g y 1 8 , 2 6 3 - 2 7 0 . N i g g l i , V . , A d u n y a h , E . S . a n d C a r a f o l i E . ( 1 9 8 1 ) A c i d i c p h o s p h o l i p i d s , u n s a t u r a t e d f a t t y a c i d s , a n d l i m i t e d p r o t e o l y s i s m i m i c t h e e f f e c t o f c a l m o d u l i n o n t h e p u r i f i e d e r y t h r o c y t e Ca + - A T P a s e . J . B i o l . Chem . 2 5 6 , 8 5 8 8 - 8 5 9 2 . - 174 -N i g g l i , V . , P e n n i s t o n , J . T . a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 7 9 ) P u r i f i c a t i o n o f t h e ( C a + + M g 2 + ) - A T P a s e f r o m human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s u s i n g a c a l m o d u l i n a f f i n i t y c o l u m n . J . B i o l . C hem . 2 5 4 , 9 9 5 5 - 9 9 5 8 . N o r m a n , J . A . , D r ummond , A . H . , a n d M o s e r , P . ( 1 9 7 9 ) I n h i b i t i o n o f c a l c i u m d e p e n d e n t r e g u l a t o r - s t i m u l a t e d p h o s p h o d i e s t e r a s e a c t i v i t y b y n e u r o l e p t i c d r u g s i s u n r e l a t e d t o t h e i r c l i n i c a l e f f i c a c y . M o l . P h a r m a c o l . 1 6 , 1 0 8 9 - 1 0 9 4 . O ' D o h e r t y , J . a n d S t a r k , R . J . ( 1 9 8 2 ) S t i m u l a t i o n o f p a n c r e a t i c a c i n a r s e c r e t i o n : i n c r e a s e s i n c y t o s o l i c c a l c i u m a n d s o d i u m . Am. J . P h y s i o l . 2 4 2 , G 5 1 3 - G 5 2 1 . P e a r s o n , G . T . , S i n g h , J . , D a o u d , M . S . , D a v i s o n , J . S . a n d P e t e r s e n , O . H . ( 1 9 8 1 ) C o n t r o l o f p a n c r e a t i c c y c l i c n u c l e o t i d e l e v e l s a n d a m y l a s e s e c r e t i o n b y n o n c h o l i n e r g i c , n o n a d r e n e r g i c n e r v e s : a s t u d y e m p l o y i n g e l e c t r i c a l f i e l d s t i m u l a t i o n o f g u i n e a p i g s e g m e n t s . J . B i o l . C hem . 2 5 6 , 1 1 0 2 5 - 1 1 0 3 1 . P e r k i n , S . R . , C o s t e n b a d e r , C L . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 9 ) A c t i o n s o f d e r i v a t i v e s o f c y c l i c n u c l e o t i d e s o n d i s p e r s e d a c i n i f r o m g u i n e a p i g p a n c r e a s : d i s c o v e r y o f a c o m p e t i t i v e a n t a g o n i s t o f t h e a c t i o n o f c h o l e c y s t o k i n i n . J . B i o l . Chem . 2 5 4 , 5 3 2 1 - 5 3 2 7 . P e n n i s t o n , J . T . ( 1 9 8 2 ) . P l a s m a memb rane Ca - p u m p i n g A T P a s e s . A n n . N . Y . A c a d . S c i . 4 0 2 , 2 9 6 - 3 0 3 . P e r k i n s , J . P . ( 1 9 7 3 ) A d e n y l c y c l a s e . A d v . C y c l i c N u c l e o t i d e R e s . 3 , 1 - 6 4 . P e t e r s e n , O . H . a n d M a r u y a m a , Y . ( 1 9 8 3 ) Wha t i s t h e m e c h a n i s m o f t h e c a l c i u m i n f l u x t o p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s e v o k e d b y s e c r e t a g o g u e s ? P f l u g e r s A r c h . 3 9 6 , 8 2 - 8 4 . P e t e r s e n , O . H . a n d P h i l p o t t , H . G . ( 1 9 7 9 ) P a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s : e f f e c t s o f m i c r o i o n t o p h o r e t i c p o l y p e p t i d e a p p l i c a t i o n o n m e m b r a n e p o t e n t i a l a n d r e s i s t a n c e . J . P h y s i o l . 2 9 0 , 3 0 5 - 3 1 5 . P e t e r s e n , O . H . a n d U e d a , N . ( 1 9 7 6 ) P a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s : t h e r o l e o f c a l c i u m i n s t i m u l u s - s e c r e t i o n c o u p l i n g . J . P h y s i o l . 2 5 4 , 5 8 3 - 6 0 6 . P h i l p o t t , H . G . , a n d P e t e r s e n , O . H . ( 1 9 7 9 ) S e p a r a t e a c t i v a t i o n s i t e s f o r c h o l e c y s t o k i n i n a n d b o m b e s i n o n p a n c r e a t i c a c i n i . A n e l e c t r o p h y s i o l o g i c a l s t u d y e m p l o y i n g a c o m p e t i t i v e a n t a g o n i s t f o r t h e a c t i o n o f CCK . P f l u g e r s A r c h . 3 8 2 , 2 6 3 - 2 6 7 . P o n n a p p a , B . C . , D o r m e r , R . L . a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 8 1 ) C h a r a c t e r i z a t i o n o f a n A T P - d e p e n d e n t C a 2 + u p t a k e s y s t e m i n mouse p a n c r e a t i c m i c r o s o m e s . Am . J . P h y s i o l . 2 4 0 , G 1 2 2 - G 1 2 9 . - 175 -P o r z i g , H . ( 1 9 7 2 ) A T P - i n d e p e n d e n t c a l c i u m n e t movemen t i n human r e d c e l l g h o s t s . J . M e m b r a n e B i o l . 8 , 2 3 7 - 2 5 8 . Q u i s t , E . E . a n d R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 7 5 ) D e t e r m i n a t i o n o f t h e s t o i c h i o m e t r y o f t h e c a l c i u m pump i n human e r y t h r o c y t e s u s i n g l a n t h a n u m a s a s e l e c t i v e i n h i b i t o r F EBS L e t t . 5 0 , 1 3 5 - 1 3 9 . R a e s s , B . U . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 8 0 a ) C a l m o d u l i n a c t i v a t i o n o f r e d b l o o d c e l l ( C a 2 + + Mg + ) - A T P a s e a n d i t s a n t a g o n i s m by p h e n o t h i z i n e s . M o l . P h a r m a c o l . 1 8 , 2 5 3 - 2 5 8 . R a e s s , B . U . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 8 0 b ) A s e m i - a u t o m a t e d m e t h o d f o r t h e d e t e r m i n a t i o n o f m u l t i p l e memb r ane A T P a s e a c t i v i t i e s . J . P h a r m a c o l . M e t h o d s 4 , 2 7 3 - 2 8 3 . R e g a , A . F . a n d G a r r a h a n , P . J . ( 1 9 7 5 ) . C a l c i u m i o n - d e p e n d e n t p h o s p h o r y l a t i o n o f human e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s . J . M e m b r a n e B i o l . 2 2 , 3 1 3 - 3 2 7 . R e g a , A . F . a n d G a r r a h a n , P . J . ( 1 9 7 8 ) C a l c i u m i o n - d e p e n d e n t d e p h o s p h o r y l a t i o n o f t h e Ca + - A T P a s e o f human r e d - c e l l s b y A D P . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 5 0 7 , 1 8 2 - 1 8 4 . R e i d , R . E . a n d H o d g e s , R . S . ( 1 9 8 0 ) C o - o p e r a t i v i t y a n d C a 2 + / M g 2 + b i n d i n g t o t r o p o n i n C a n d m u s c l e c a l c i u m b i n d i n g p a r v a l b u m i n : a n h y p o t h e s i s . J . T h e o r . B i o l . 8 4 , 4 0 1 - 4 4 4 . R e n c k e n s , B . A . M . , S c h r i j e n , J . J . , S w a r t z , H . G . P . , De P o n t , J . J . H . H . M . a n d B o n t i n g , S . L . ( 1 9 7 8 ) R o l e o f c a l c i u m i n e x o c r i n e p a n c r e a t i c s e c r e t i o n . I V . C a l c i u m m o v e m e n t s i n i s o l a t e d a c i n a r c e l l s o f r a b b i t p a n c r e a s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 5 4 4 , 3 3 8 - 3 5 0 . R i c h a r d s , D . E . , R e g a , A . F . a n d G a r r a h a n , P . J . ( 1 9 7 8 ) Two c l a s s e s o f s i t e f o r ATP i n t h e C a 2 + - A T P a s e f r o m human r e d c e l l m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 5 1 1 , 1 9 4 - 2 0 1 . R i n d e r k n e c h t , H . , R e n n e r , I . G . , D o u g l a s , A . P . a n d A d h a m , N . F . ( 1 9 7 8 ) P r o f i l e s o f p u r e p a n c r e a t i c s e c r e t i o n s o b t a i n e d b y d i r e c t p a n c r e a t i c d u c t c a n n u l a t i o n i n n o r m a l h e a l t h y human s u b j e c t s . G a s t r o e n t e r o l o g y . 7 5 , 1 0 8 3 - 1 0 8 9 . R i v i e r , J . a n d B r o w n , M . ( 1 9 7 8 ) B o m b e s i n , b o m b e s i n a n d a n a l o g u e s a n d r e l a t e d p e p t i d e s : e f f e c t s o n t h e r m o r e g u l a t i o n . B i o c h e m i s t r y . 1 7 , 1 7 6 6 - 1 7 7 1 . R o b b e r e c h t , P . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 1 ) S e c r e t i o n o f h y d r o l a s e s b y p e r f u s e d f r a g m e n t s o f r a t p a n c r e a s : e f f e c t o f c a l c i u m . Am. J . P h y s i o l . 2 2 0 , 9 1 1 - 9 1 7 . - 176 -R o b b e r e c h t , P . , C o n l o n , T . P . a n d G a r d n e r , J . D . ( 1 9 7 6 ) I n t e r a c t i o n o f p o r c i n e v a s o a c t i v e i n t e s t i n a l p e p t i d e w i t h d i s p e r s e d a c i n a r c e l l s f r o m t h e g u i n e a p i g : S t r u c t u r a l r e q u i r e m e n t s f o r e f f e c t s o f V I P a n d s e c r e t i n on c e l l u l a r c y c l i c AMP . J . B i o l . C h e m . 2 5 1 , 4 6 3 5 - 4 6 3 9 . R o b b e r e c h t , P . , D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . , L a m m e n s , M . , D e N e e f P . , a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 7 ) I n v i t r o e f f e c t s o f s e c r e t i n a n d v a s o a c t i v e i n t e s t i n a l p o l y p e p t i d e o n h y d r o l a s e s e c r e t i o n a n d c y c l i c AMP l e v e l s i n t h e p a n c r e a s o f f i v e a n i m a l s p e c i e s . A c o m p a r i s o n w i t h c a e r u l e i n . G a s t r o e n t e r o l . C l i n . B i o l . 1 , 5 1 9 - 5 2 5 . R o n n e r , P .^ G a z z o | t i , P . a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 7 7 ) A l i p i d r e q u i r e m e n t f o r ( C a + Mg + ) A c t i v a t e d A T P a s e o f e r y t h r o c y t e m e m b r a n e s . A r c h . B i o c h e m . B i o p h y s . 1 7 9 , 5 7 8 - 5 8 3 . R o t h m a n , S . S . ( 1 9 8 0 ) P a s s a g e o f p r o t e i n s t h r o u g h m e m b r a n e s - o l d a s s u m p t i o n s a n d new p e r s p e c t i v e s . Am . J . P h y s i o l . 2 3 8 , G 3 9 1 - G 4 0 2 . R o t h m a n , S . S . a n d W i l k i n g , H . ( 1 9 7 8 ) D i f f e r e n t i a l r a t e s o f d i g e s t i v e e n z y m e t r a n s p o r t i n t h e p r e s e n c e o f c h o l e c y s t o k i n i n - p a n c r e o z y m i n . J . B i o l . C hem . 2 5 3 , 3 5 4 3 - 3 5 4 9 . R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 1 ) P h e n o t h i z i n e a n t a g o n i s m o f c a l m o d u l i n : a s t r u c t u r a l l y - n o n s p e c i f i c i n t e r a c t i o n . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 9 8 , 6 0 7 - 6 1 3 . R o u f o g a l i s , B . D . ( 1 9 8 2 ) S p e c i f i c i t y o f t r i f l u o p e r a z i n e a n d r e l a t e d p h e n o t h i z i n e s f o r C a 2 + b i n d i n g p r o t e i n s . I n : C a l c i u m a n d C e l l F u n c t i o n , V o l . 3 ( C h e u n g , E . Y . e d ) A c a d . P r e s s , N . Y . R u t t e n , W . J . , D e P o n t , J . J . H . H . M . a n d B o n t i n g , S . L . ( 1 9 7 2 ) A d e n y l a t e c y c l a s e i n t h e r a t p a n c r e a s . P r o p e r t i e s a n d s t i m u l a t i o n b y h o r m o n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 2 7 4 , 2 0 1 - 2 1 3 . S a f f r a n , E . K . a n d K i n n e , R. ( 1 9 7 4 ) L o c a l i z a t i o n o f a c a l c i u m - s t i m u l a t e d A T P a s e i n t h e b a s a l - l a t e r a l p l a s m a m e m b r a n e s o f t h e p r o x i m a l t u b u l e o f r a t k i d n e y c o r t e x . J . M e m b r . B i o l . 1 7 , 2 6 3 - 2 7 4 . S a n k a r a n , H . , G o l d f i n e , I . D . , D e v e n e y , C . W . , W o n g , K - Y a n d W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 8 0 ) B i n d i n g o f c h o l e c y s t o k i n i n t o h i g h a f f i n i t y r e c e p t o r s o n i s o l a t e d r a t p a n c r e a t i c a c i n i . J . B i o l . C hem . 2 5 5 , 1 8 4 9 - 1 8 5 3 . S a r k a d i , B . ( 1 9 8 0 ) A c t i v e c a l c i u m t r a n s p o r t i n human r e d c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 6 0 4 , 1 5 9 - 1 9 0 . S a r k a d i , B . , E n y e d i , A . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 8 0 ) M o l e c u l a r p r o p e r t i e s o f t h e r e d c e l l c a l c i u m pump . I I E f f e c t s o f c a l m o d u l i n , p r o t e o l y t i c d i g e s t i o n a n d d r u g s o n t h e k i n e t i c s o f a c t i v e c a l c i u m u p t a k e i n i n s i d e - o u t r e d c e l l membrane v e s i c l e s . C e l l C a l c i u m 1, 2 8 7 - 2 9 7 . - 177 -S a r k a d i , B . , S c h u b e r t , A . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 7 9 ) E f f e c t s o f C a - E G T A b u f f e r s on a c t i v e c a l c i u m - t r a n s p o r t i n i n s i d e - o u t r e d c e l l m e m b r a n e v e s i c l e s . E x p e r i e n t i a 3 5 , 1 0 4 5 - 1 0 4 7 . S a r k a d i , B . , S z a s z , I . , G e r l o c z y , A . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 7 7 ) T r a n s p o r t p a r a m e t e r s a n d s t o i c h i o m e t r y o f a c t i v e c a l c i u m i o n e x t r u s i o n i n i n t a c t human r e d c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 4 6 4 , 9 3 - 1 0 7 ) . S c h a r f f , 0 . ( 1 9 7 2 ) T h e i n f l u e n c e o f c a l c i u m i o n s o n t h e p r e p a r a t i o n o f t h e ( C a 2 + + M g ) - a c t i v a t e d memb r ane A T P a s e i n human r e d c e l l s . S c a n d . J . C l i n . L a b . I n v e s t . 3 0 , 3 1 3 - 3 2 0 . S c h a r f f , 0 . ( 1 9 8 1 ) C a l m o d u l i n - a n d i t s r o l e i n c e l l u l a r a c t i v a t i o n . C e l l C a l c i u m 2 , 1 - 2 7 . S c h a r f f , 0 . a n d F o d e r , B . ( ^ 9 7 7 ) . L o w C a 2 + c o n c e n t r a t i o n s c o n t r o l l i n g two k i n e t i c s t a t e s o f Ca + - A T P a s e f r o m human e r y t h r o c y t e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 4 8 3 , 4 1 6 - 4 2 4 . S c h a t z m a n n , H . J . ( 1 9 6 6 ) ATP d e p e n d e n t c a l c i u m e x t r u s i o n f r o m human r e d c e l l s . E x p e r i e n t i a . 2 2 , 3 6 4 - 3 6 5 . 9 -L. S c h a t z m a n n , H . J . ( 1 9 7 7 ) R o l e o f m a g n e s i u m i n t h e ( C a + M g 2 + ) - s t i m u l a t e d memb r ane A T P a s e o f human r e d b l o o d c e l l s . J . M e m b r a n e B i o l . 3 5 , 1 4 9 - 1 5 8 . S c h a t z m a n n , H . J . a n d B u r g i n , H . ( 1 9 7 8 ) C a l c i u m i n human r e d b l o o d c e l l s . A n n . N . Y . A c a d . S c i . 3 0 7 , 1 2 5 - 1 4 7 . S c h a t z m a n n , H . J . a n d R o s s i , G . L . ( 1 9 7 1 ) ( C a 2 + + M g 2 + ) - a c t i v a t e d memb rane A T P a s e s i n human r e d c e l l s a n d t h e i r p o s s i b l e r e l a t i o n t o c a t i o n t r a n s p o r t . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 2 4 1 , 3 7 9 - 3 9 2 . S c h a t z m a n n , H . J . a n d V i n c e n z i , F . F . ( 1 9 6 9 ) C a l c i u m m o v e m e n t s a c r o s s t h e m e m b r a n e s o f human r e d c e l l s . J . P h y s i o l . 2 0 1 , 3 6 9 - 3 9 5 . S c h e e l e , G . ( 1 9 7 5 ) Two d i m e n s i o n a l g e l a n a l y s i s o f s o l u b l e p r o t e i n s . C h a r a c t e r i z a t i o n o f g u i n e a p i g e x o c r i n e p a n c r e a t i c p r o t e i n s . J . B i o l . Chem . 2 5 0 , 5 3 7 5 - 5 3 8 5 . S c h e e l e , G . A . ( 1 9 8 0 ) B i o s y n t h e s i s , S e g r e g a t i o n a n d s e c r e t i o n o f e x p o r t a b l e p r o t e i n s b y t h e e x o c r i n e p a n c r e a s . Am . J . P h y s i o l . 2 3 8 , G 4 6 7 - G 4 7 7 . S c h e e l e , G . a n d H a y m o v i t s , A . ( 1 9 7 9 ) C h o l i n e r g i c a n d p e p t i d e s t i m u l a t e d d i s c h a r g e o f s e c r e t o r y p r o t e i n i n g u i n e a p i g p a n c r e a t i c l o b u l e s : R o l e o f i n t r a c e l l u l a r a n d e x t r a c e l l u l a r C a l c i u m . J . B i o l . C hem . 2 5 4 , 1 0 3 4 6 - 1 0 3 5 3 . - 178 -S c h e e l e , G . a n d H a y m o v i t s , A . ( 1 9 8 0 ) P o t a s s i u m a n d i o n o p h o r e A 2 3 1 8 7 - i n d u c e d d i s c h a r g e o f s e c r e t o r y p r o t e i n i n g u i n e a p i g p a n c r e a t i c l o b u l e s : R o l e o f e x t r a c e l l u l a r c a l c i u m . J . B i o l . Chem . 2 5 5 , 4 9 1 8 - 4 9 2 7 . S c h e e l e , G . A . a n d P a l a d e , G . E . ( 1 9 7 5 ) S t u d i e s o n t h e g u i n e a p i g p a n c r e a s . P a r a l l e l d i s c h a r g e o f e x o c r i n e e n z y m e a c t i v i t i e s . J . B i o l . C hem . 2 5 0 , 2 6 6 0 - 2 6 7 0 . S c h e e l e , G . A . P a l a d e , G . E . a n d T a r t a k o f f , A . ( 1 9 7 8 ) C e l l f r a c t i o n a t i o n s t u d i e s on t h e g u i n e a p i g p a n c r e a s . R e d i s t r i b u t i o n o f e x o c r i n e p r o t e i n s d u r i n g t i s s u e h o m o g e n i z a t i o n . J . C e l l B i o l . 7 8 , 1 1 0 - 1 3 0 . S c h n e i d e r , C , M o t t o l a , C . a n d R o m e o , D. ( 1 9 7 9 ) C a l c i u m i o n - d e p e n d e n t a d e n o s i n e t r i p h o s p h a t a s e a c t i v i t y a n d p l a s m a - m e m b r a n e p h o s p h o r y l a t i o n i n t h e human n e u t r o p h i l . B i o c h e m . J . 1 8 2 , 6 5 5 - 6 6 0 . S c h u l z , I . ( 1 9 8 0 ) M e s s e n g e r r o l e o f c a l c i u m i n f u n c t i o n o f p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . A m . J . P h y s i o l . 2 3 9 , G 3 3 5 - G 3 4 7 . S c h u l z , I . a n d H e i l , K . ( 1 9 7 9 ) C a 2 + c o n t r o l o f e l e c t r o l y t e p e r m e a b i l i t y i n p l a s m a memb rane v e s i c l e s f r o m c a t p a n c r e a s . J . M e m b r a n e B i o l . 4 6 , 4 1 - 7 0 . S c h u l z , I . a n d S t o l z e , H . ( 1 9 8 0 ) T h e e x o c r i n e p a n c r e a s : t h e r o l e o f s e c r e t a g o g u e s , c y c l i c n u c l e o t i d e s , a n d c a l c i u m i n e n z y m e s e c r e t i o n . A n n . R e v . P h y s i o l . 4 2 , 1 2 7 - 1 5 6 . S c r a t c h e r d , T . H u t s o n , D. a n d C a s e , R . M . ( 1 9 8 1 ) I o n i c t r a n s p o r t m e c h a n i s m s u n d e r l y i n g f l u i d s e c r e t i o n b y t h e p a n c r e a s . P h i l . T r a n s . R. S o c . L o n d . B . 2 9 6 , 1 6 7 - 1 7 8 . S h a r m a , R . K . , D e s a i , R . , T h o m p s o n , T . R . a n d W a n g , J . H . ( 1 9 7 8 ) . P u r i f i c a t i o n o f t h e h e a t s t a b l e i n h i b i t o r p r o t e i n o f t h e C a - a c t i v a t e d c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e b y a f f i n i t y c h r o m a t o g r a p h y . C a n . J . B i o c h e m . 5 6 , 5 9 8 - 6 0 4 . S h e n , V . , K o h l e r , G . a n d P e c k , W . A . ( 1 9 8 3 ) A h i g h a f f i n i t y , c a l m o d u l i n - r e s p o n s i v e ( C a + Mg ) - A T P a s e i n i s o l a t e d b o n e c e l l s B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 7 2 7 , 2 3 0 - 2 3 8 . S i n g h , M . ( 1 9 8 0 ) A m y l a s e r e l e a s e f r o m d i s s o c i a t e d mou se p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s s t i m u l a t e d b y g l u c a g o n : e f f e c t o f membrane s t a b i l i z e r s . J . P h y s i o l . 3 0 9 , 8 1 - 9 1 . S i n g h , M . ( 1 9 8 2 ) R o l e o f c y c l i c a d e n o s i n e m o n o p h o s p h a t e i n a m y l a s e r e l e a s e f r o m d i s s o c i a t e d r a t p a n c r e a t i c a c i n i . J . P h y s i o l . 3 3 1 , 5 4 7 - 5 5 5 . S m o a k e , J . A . , S o n g , S . Y . , a n d C h e u n g , W . Y . ( 1 9 7 4 ) C y c l i c 3 1 , 5 ' - n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e d i s t r i b u t i o n a n d d e v e l o p m e n t a l c h a n g e s o f t h e e n z y m e a n d i t s p r o t e i n a c t i v a t o r i n m a m m a l i a n t i s s u e s a n d c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 3 4 1 , 4 0 2 - 4 1 1 . - 179 -S o b u e , K . , I c h i d a , S . , Y o s h i d a , H . , Y a m a z a k i , R. a n d K a k i u c h i , S . ( 1 9 7 9 ) . O c c u r r e n c e o f a Ca a n d m o d u l a t o r p r o t e i n a c t i v a t a b l e A T P a s e i n t h e S y n a p t i c p l a s m a m e m b r a n e s o f b r a i n . F E B S L e t t . 9 9 , 1 9 9 - 2 0 2 . S o l i n g , H . D . a n d U n g e r , K . O . ( 1 9 7 2 ) The r o l e o f i n s u l i n i n t h e r e g u l a t i o n o f a - a m y l a s e s y n t h e s i s i n t h e r a t p a n c r e a s . E u r . J . C l i n . I n v e s t . 2 , 1 9 9 - 2 1 2 . S p a r r o w , M . P . a n d J o h n s t o n e , B . M . ( 1 9 6 4 ) A r a p i d m i c r o m e t h o d f o r e x t r a c t i o n o f c a l c i u m a n d m a g n e s i u m f r o m t i s s u e . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a 9 0 , 4 2 5 - 4 2 6 . S t e e r , M . L . a n d G l a z e r , G . ( 1 9 7 6 ) P a r a l l e l s e c r e t i o n o f d i g e s t i v e e n z y m e s b y t h e i n v i t r o r a b b i t p a n c r e a s . Am. J . P h y s i o l . 2 3 1 , 1 8 6 0 - 1 8 6 5 . S t e e r , M . L . a n d M a n a b e , T . ( 1 9 7 9 ) C h o l e c y s t o k i n i n - p a n c r e o z y m i n i n d u c e s t h e p a r a l l e l d i s c h a r g e o f d i g e s t i v e e n z y m e s f r o m t h e in v i t r o r a b b i t p a n c r e a s . J . B i o l . C h e m . 2 5 4 , 7 2 2 8 - 7 2 2 9 . S t e v e n s , F . C . , W a l s h , M . , H o , H . T e o , T . S . a n d W a n g , J . H . ( 1 9 7 6 ) . C o m p a r i s o n o f c a l c i u m b i n d i n g p r o t e i n s : b o v i n e h e a r t a n d b r a i n p r o t e i n a c t i v a t o r s o f c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e a n d r a b b i t s k e l e t a l m u s c l e t r o p o n i n C . J . B i o l . C hem . 2 5 1 , 4 4 9 5 - 4 5 0 0 . S t o l z e , H . a n d S c h u l z , I . ( 1 9 8 0 ) E f f e c t o f a t r o p i n e , o u a b a i n , a n t i m y c i n A . a n d A 2 3 1 8 7 on t h e " t r i g g e r C a 2 + p o o l " i n e x o c r i n e p a n c r e a s . Am. J . P h y s i o l . 2 3 8 , G 3 3 8 - G 3 4 8 . S v o b o d a , M . , R o b b e r e c h t , P . , C a m u s , J . , D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 6 ) S u b c e l l u l a r d i s t r i b u t i o n a n d r e s p o n s e t o g a s t r o i n t e s t i n a l h o r m o n e s o f a d e n y l a t e c y c l a s e i n r a t p a n c r e a s . E u r . J . B i o c h e m . 6 9 , 1 8 5 - 1 9 3 . S v o b o d a , M . , R o b b e r e c h t , P . , C a m u s , J . , D e s c h o d t - L a n c k m a n , M . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 8 ) A s s o c i a t i o n o f b i n d i n g s i t e s f o r g u a n i n e n u c l e o t i d e s w i t h a d e n y l a t e c y c l a s e a c t i v a t i o n i n r a t p a n c r e a t i c p l a s m a m e m b r a n e s . I n t e r a c t i o n o f g a s t r o i n t e n s t i n a l h o r m o n e s . E u r . J . B i o c h e m . 8 3 , 2 8 7 - 2 9 7 . S z a s z , I . S a r k a d i , B . , S c h u b e r t , A . a n d G a r d o s , G . ( 1 9 7 8 ) E f f e c t s o f l a n t h a n u m o n c a l c i u m - d e p e n d e n t p h e n o m e n a i n human r e d c e l l s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 5 1 2 , 3 3 1 - 3 4 0 . T a n a k a , T . a n d H i d a k a , H . ( 1 9 8 0 ) H y d r o p h o b i c r e g i o n s f u n c t i o n s i n c a l m o d u l i n - e n z y m e i n t e r a c t i o n . J . B i o l . C hem . 2 5 5 , 1 1 0 7 8 - 1 1 0 8 0 . T a v e r n a , R . D . a n d H a n a h a n , D . J . ( 1 9 8 0 ) M o d u l a t i o n o f human e r y t h r o c y t e C a + / M g + A T P a s e a c t i v i t y b y p h o s p h o l i p a s e A 2 a n d p r o t e a s e s . A c o m p a r i s o n w i t h c a l m o d u l i n . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 9 4 , 6 5 2 - 6 5 9 . - 180 -T a w a t a , M . a n d F i e l d , J . B . ( 1 9 8 2 ) C a l m o d u l i n - b i n d i n g p r o t e i n s o f b o v i n e t h y r o i d p l a s m a m e m b r a n e s . B i o c h i m . B i o p h y s . A c t a . 7 1 9 , 4 0 6 - 4 1 0 . T e r a i , M . , F u r i h a t a , C , M a t s u s h i m a , T . a n d S u g i m u r a , T . ( 1 9 7 6 ) P a r t i a l p u r i f i c a t i o n o f a d e n o s i n e 3 ' , 5 ' - c y c l i c m o n o p h o s p h a t e p h o s p h o d i e s t e r a s e s f r o m r a t p a n c r e a s i n t h e p r e s e n c e o f e x c e s s p r o t e a s e i n h i b i t o r s . A r c h . B i o c h e m . B i o p h y s . 1 7 6 , 6 2 1 - 6 2 9 . T r a m s , E . G . ( 1 9 7 4 ) E v i d e n c e f o r ATP a c t i o n o n t h e c e l l s u r f a c e . N a t u r e 2 5 2 , 4 8 0 - 4 8 2 . U e d a , N . , S u z u k i , Y . , O k o m u r a , K . a n d N a m i k i , M . ( 1 9 8 0 ) D i b u t y r y l c y c l i c GMP i n h i b i t s c a e r u l e i n - b u t n o t A C h - , b o m b e s i n - o r s e c r e t i n - e v o k e d f l u i d s e c r e t i o n i n t h e p e r f u s e d r a t p a n c r e a s . I n : B i o l o g y o f N o r m a l a n d C a n c e r o u s E x o c r i n e P a n c r e a t i c C e l l s . R i b e t , A . , P r a d a y r o l , L . a n d S u s i n i , C . e d s . pp 5 5 - 6 0 , E l s e v i e r / N o r t h - H o l l a n d , A m s t e r d a m . V a n E l d i k , L . J . , P i p e r n o , G . a n d W a t t e r s o n , D . M . ( 1 9 8 0 ) S i m i l a r i t i e s a n d d i s s i m i l a r i t i e s b e t w e e n c a l m o d u l i n a n d a C h l a m y d o m o n a s f l a g e l l a r p r o t e i n . P r o c . N a t l . A c a d . S c i . , U . S . A . 7 7 , 4 7 7 9 - 4 7 8 3 . V a n d e r m e e r s , A . , R o b b e r e c h t , P . a n d V a n d e r m e e r s - P i r e t , M . ( 1 9 7 8 ) . S p e c i f i c b i n d i n g o f t h e c a l c i u m d e p e n d e n t r e g u l a t o r p r o t e i n t o b r a i n m e m b r a n e s f r o m t h e g u i n e a p i g . B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 8 4 , 1 0 7 6 - 1 0 8 1 . V a n d e r m e e r s , A . , V a n d e r m e e r s - P i r e t , M . , R a t h e , J . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 8 3 ) P u r i f i c a t i o n a n d k i n e t i c p r o p e r t i e s o f two s o l u b l e f o r m s o f c a l m o d u l i n - d e p e n d e n t c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e f r o m r a t p a n c r e a s . B i o c h e m . J . 2 1 1 , 3 4 1 - 3 4 7 . V a n d e r m e e r s , A . , V a n d e r m e e r s - P i r e t , M . R a t h e , J . , K u t z n e r , R . , D e l f o r g e , A . a n d C h r i s t o p h e , J . ( 1 9 7 7 ) A c a l c i u m - d e p e n d e n t p r o t e i n a c t i v a t o r o f g u a n o s i n e 3 ' - 5 ' - m o n o p h o s p h a t e p h o s p h o d i e s t e r a s e i n b o v i n e a n d r a t p a n c r e a s : i s o l a t i o n , p r o p e r t i e s a n d l e v e l s i n v i t r o . E u r . J . B i o c h e m . 8 1 , 3 7 9 - 3 8 6 . V e r e c k a , L . a n d C a r a f o l i , E . ( 1 9 8 2 ) V a n a d a t e i n d u c e d m o v e m e n t s o f C a 2 + a n d K + i n human r e d b l o o d c e l l s . J . B i o l . C hem . 2 5 7 , 7 4 1 4 - 7 4 2 1 . V e r m a , A . K . a n d P e n n i s t o n , J . T . ( 1 9 8 1 ) A h i g h a f f i n i t y C a 2 + - d e p e n d e n t A T P a s e i n r a t c o r p u s l u t e u m p l a s m a memb rane f r a c t i o n s . J . B i o l . C h e m . 2 5 6 , 1 2 6 9 - 1 2 7 5 , 1 9 8 1 . W a k a s u g i , H . K i m u r a , T . , H a a s e , W . , K r i b b e n , A . K a u f m a n n , R. a n d S c h u l z , I . ( 1 9 8 2 ) C a l c i u m u p t a k e i n t o a c i n i f r o m r a t p a n c r e a s : E v i d e n c e f o r i n t r a c e l l u l a r A T P - d e p e n d e n t c a l c i u m s e q u e s t r a t i o n . J . M e m b r a n e B i o l . 6 5 , 2 0 5 - 2 2 0 . - 181 -W a k a s u g i , H . , S t o l z e , H . , H a a s e , W. a n d S c h u l z , I . ( 1 9 8 1 ) E f f e c t o f L a on s e c r e t a g o g u e - i n d u c e d C a 2 + f l u x e s i n r a t i s o l a t e d p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . Am. J . P h y s i o l . 2 4 0 , G 2 8 1 - G 2 8 9 . W a n g , J . H . a n d D e s a i , R. ( 1 9 7 7 ^ M o d u l a t o r b i n d i n g p r o t e i n - A b o v i n e b r a i n p r o t e i n e x h i b i t i n g C a + - d e p e n d e n t a s s o c i a t i o n . J . B i o l . C h e m . 2 5 2 , 4 1 7 5 - 4 1 8 4 . W a t t e r s o n , D . M . , H a r v e l s o n , W . G . K e l l e r , P . M . S h a r i e f , F . a n d V a n a m a n , T . C . ( 1 9 7 6 ) S t r u c t u r a l s i m i l a r i t i e s b e t w e e n t h e C a 2 + - d e p e n d e n t r e g u l a t o r y p r o t e i n s o f 3 ' : 5 ' c y c l i c n u c l e o t i d e p h o s p h o d i e s t e r a s e a n d a c t o m y o s i n A T P a s e . J . B i o l . C h e m . 2 5 1 , 4 5 0 1 - 4 5 1 3 . W a t t e r s o n , D . , S h a r i e f , F . , a n d V a n a m a n , T . C . ( 1 9 8 0 ) T h e c o m p l e t e a m i n o a c i d s e q u e n c e o f t h e C a 2 + - d e p e n d e n t m o d u l a t o r p r o t e i n ( c a l m o d u l i n ) o f b o v i n e b r a i n . J . B i o l . C h e m . 2 5 5 , 9 6 2 - 9 7 5 . W e i s s , B . , P r o z i a l e c k , W . C . a n d W a l l a c e , T . L . ( 1 9 8 2 ) I n t e r a c t i o n o f d r u g s w i t h c a l m o d u l i n : B i o c h e m i c a l , p h a r m a c o l o g i c a l a n d c l i n i c a l i m p l i c a t i o n s . B i o c h e m . P h a r m a c o l . 3 1 , 2 2 1 7 - 2 2 2 6 . W h a r t o n , D . C . a n d T z a g o l o f f , A . ( 1 9 6 7 ) C y t o c h r o m e o x i d a s e f r o m b e e f h e a r t m i t o c h o n d r i a . M e t h o d s E n z y m o l . 1 0 , 2 4 5 - 2 5 0 . W h i t f i e l d , J . F . , B o y n t o n , A . L . , M a c M a n u s , J . P . , S i k o r s k a , M . a n d T s a n g , B . K . ( 1 9 7 9 ) . T h e r e g u l a t i o n o f c e l l p r o l i f e r a t i o n b y c a l c i u m a n d c y c l i c AMP . M o l . C e l l . B i o c h e m . 2 7 , 1 5 5 - 1 7 9 . W i l l i a m s , J . A . ( 1 9 8 0 ) R e g u l a t i o n o f p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l f u n c t i o n b y i n t r a c e l l u l a r c a l c i u m . Am. J . P h y s i o l . 2 3 8 , G 2 6 9 - G 2 7 9 . W i l l i a m s , J . A . a n d C h a n d l e r , D. ( 1 9 7 5 ) Ca"1-*" a n d p a n c r e a t i c a m y l a s e r e l e a s e . Am. J . P h y s i o l . 2 2 8 , 1 7 2 9 - 1 7 3 2 . W i l l i a m s , J . A . , K o r c , M . , a n d D o r m e r , R . L . ( 1 9 7 8 ) A c t i o n o f s e c r e t a g o g u e s on a new p r e p a r a t i o n o f f u n c t i o n a l l y i n t a c t , i s o l a t e d p a n c r e a t i c a c i n i . Am. J . P h y s i o l . 2 3 5 , E 5 1 7 - E 5 2 4 . W i l l i a m s , J . A . , P o u l s e n , J . H . a n d L e e , M . ( 1 9 7 7 ) E f f e c t s o f memb rane s t a b i l i z e r s o n p a n c r e a t i c a m y l a s e r e l e a s e . J . M e m b r a n e B i o l . 3 3 , 1 8 5 - 1 9 5 . W i l l i a m s , J . A . , S a n k a r a n , H . , K o r c , M . a n d G o l d f i n e , I . D . ( 1 9 8 1 ) R e c e p t o r s f o r c h o l e c y s t o k i n i n a n d i n s u l i n i n i s o l a t e d p a n c r e a t i c a c i n i : h o r m o n a l c o n t r o l o f s e c r e t i o n a n d m e t a b o l i s m . F e d e r a t i o n P r o c . 4 0 , 2 4 9 7 - 2 5 0 2 . W o l f f , D . J . , P o i r i e r , P . G . , B r o s t r o m , C D . a n d B r o s t r o m , M . A . ( 1 9 7 7 ) D i v a l e n t c a t i o n b i n d i n g p r o p e r t i e s o f b o v i n e b r a i n C a 2 + - d e p e n d e n t r e g u l a t o r p r o t e i n J . B i o l . C h e m . 2 5 2 , 4 1 0 8 - 4 1 7 7 . - 182 -W r e n n , R .W. ( 1 9 8 3 ) P h o s p h o l i p i d - s e n s i t i v e c a l c i u m d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a s e a n d i t s e n d o g e n o u s s u b s t r a t e p r o t e i n s i n r a t p a n c r e a t i c a c i n a r c e l l s . L i f e S c i . 3 2 , 2 3 8 5 - 2 3 9 2 . Y a m a k i , T . a n d H i d a k a , H . ( 1 9 8 0 ) C a 2 + - i n d e p e n d e n t s t i m u l a t i o n o f c y c l i c G M P - d e p e n d e n t p r o t e i n k i n a s e b y c a l m o d u l i n B i o c h e m . B i o p h y s . R e s . Commun. 9 4 , 7 2 7 - 7 3 3 .